新型EGFP标记的杆状病毒转移载体的构建及EGFP的制备

杨军; 王一理; 司履生

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新型EGFP标记的杆状病毒转移载体的构建及EGFP的制备

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目的构建可表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白的昆虫杆状病毒转移载体,利用Sf-9细胞表达、制备EGFP.方法用PCR法从pEGFP质粒中扩增EGFP基因,NcoⅠ/SalⅠ双酶切,克隆入杆状病毒转移载体NcoⅠ/SalⅠ酶切位点之间,获得pFB-EGFP质粒;转化E.coli DH10Bac,通过转座子Tn7的介导,获得重组杆状病毒Ac-EGFP;感染Sf-9昆虫细胞;利用激光共聚焦显微镜和SDS-PAGE观察并检测EGFP的表达.非变性法纯化EGFP.结果荧光显微镜和激光共聚焦显微镜证实感染的Sf-9细胞可表达EGFP;通过SDS-PAGE获得的EGFP,大小为27 ku.结论重组pFB-EGFP载体具备表达EGFP的能力,为分子生物学研究提供了一种新型可表达EGFP融合蛋白的昆虫杆状病毒表达载体.

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来源
《西安交通大学学报（医学版）》 |2006年第5期|433-436459|共5页
作者
杨军; 王一理; 司履生;
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作者单位

西安交通大学,医学院第二附属医院病理科,陕西,西安,710004;

西安交通大学,生命科学与技术学院癌症研究所,生物医学信息工程教育部重点实验室,陕西,西安,710061;

西安交通大学,生命科学与技术学院癌症研究所,生物医学信息工程教育部重点实验室,陕西,西安,710061;

西安交通大学,生命科学与技术学院癌症研究所,生物医学信息工程教育部重点实验室,陕西,西安,710061;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类 R34;
关键词
昆虫杆状病毒表达系统; 增强型绿色荧光蛋白;

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