兔Oddi氏括约肌细胞BK 通道Alpha亚基在Pichia酵母中的高效表达、纯化和鉴定

王亚蓉; 魏经国; 樊建勇; 沈柱; 王秦芳; 张孝勇

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目的用巴斯德毕赤酵母系统表达兔Oddi氏括约肌(SO)细胞BK 通道α亚基,并进行纯化和鉴定.方法采用RT-PCR扩增编码兔SO细胞BK通道α亚基B细胞表位区基因的cDNA,经测序正确将其克隆入酵母表达载体pPIC9K,以电穿孔法转化酵母GS115.经MD平板筛选重组子、G418筛选鉴定后,甲醇诱导表达,镍离子亲合层析法对表达上清进行纯化,进行SDS-PAGE和免疫印迹分析.结果用RT-PCR扩增出约1 497 bp的兔SO细胞BK通道α亚基基因的cDNA.序列分析显示,扩增序列与已发布的新西兰大白兔骨骼肌BK通道α亚基的cDNA序列完全一致.SDS-PAGE显示本系统表达的α亚基融合蛋白Mr约为55 000,表达量约为55 mg/L,纯度为96%.Western blot检测证明,该α亚基融合蛋白可与兔BK 通道α亚基多克隆抗体特异性结合.结论克隆了编码兔SO细胞BK通道α亚基B细胞表位区基因的cDNA,并在毕赤酵母中成功地表达了该蛋白,为进一步研究BK通道提供了物质基础.

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来源
《西安交通大学学报（医学版）》 |2005年第3期|212-215|共4页
作者
王亚蓉; 魏经国; 樊建勇; 沈柱; 王秦芳; 张孝勇;
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作者单位

第四军医大学唐都医院放射科,陕西西安,710038;

第四军医大学唐都医院放射科,陕西西安,710038;

第四军医大学唐都医院皮肤科,陕西西安,710038;

第四军医大学唐都医院皮肤科,陕西西安,710038;

第四军医大学口腔医院检验科,陕西西安,710032;

第四军医大学唐都医院放射科,陕西西安,710038;

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正文语种 chi
中图分类 R392.111;
关键词
Pichia酵母; BK 通道Alpha亚基; 分泌表达;

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