真核表达质粒pcDNA3.1(+)-A1CF的构建及在肺癌中的表达

王程; 冯爱露; 陈韦璁; 李龙飞; 石玥; 吴金霞

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目的构建Apobec-1互补因子(A1CF)真核表达质粒,转染肺癌细胞A549和H1299并检测其表达。方法提取肾癌细胞786-o中总RNA,经RT-PCR扩增人A1CF基因,通过酶切法插入pcDNA3.1(+)载体,构建pcDNA3.1(+)-A1CF真核表达质粒,经BamHI和XbaI双酶切及DNA序列测序鉴定。Lipofectamine 2000脂质体转染肺癌细胞,Western blot法检测A1CF在肺癌细胞中的表达情况。划痕和Transwell小室实验观察A1CF对肺癌迁移侵袭能力的影响。结果酶切及测序结果显示pcDNA3.1(+)-A1CF中插入的片段序列测定结果与人A1CF序列一致,重组质粒转染两种肺癌细胞后,转染组的目的蛋白表达量明显增高,且E-cadherin和P-ERK表达水平也明显增高(P<0.05)。结论成功克隆人A1CF基因cDNA,并构建真核表达质粒。A1CF促进肺癌细胞迁移侵袭可能与ERK的磷酸化有关。

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来源
《徐州医科大学学报》 |2022年第1期|51-56|共6页
作者
王程; 冯爱露; 陈韦璁; 李龙飞; 石玥; 吴金霞;
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作者单位

徐州医科大学第一临床医学院;

江苏徐州221004;

徐州医科大学生理学教研室;

徐州医科大学基础医学国家级实验教学示范中心;

徐州医科大学临床与实验病理学实验室;

徐州市肿瘤医院;

江苏徐州221000;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类发病学;
关键词
Apobec-1互补因子; 重组质粒; 侵袭; 肺癌; ERK;

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