大肠杆菌醛醇脱氢酶的纯化、分析及其在乙酰辅酶A测定中的应用

孙梅好; 刘杰; 袁熹; 蒲首丞; 巩菊芳

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为了连续测定乙酰辅酶A合成酶(acetyl-CoA synthetase,ACS)催化的乙酰辅酶A(acetyl coenzyme A,Ac-CoA)合成,探讨以醛醇脱氢酶(aldehyde/alcohol dehydrogenase,AdhE)为偶联酶检测ACS活性的可行性.以大肠杆菌(Escherichia coli K12)基因组为模板扩增、克隆AdhE基因,通过原核表达、纯化获得AdhE,对其进行了酶学动力学分析,并进一步以AdhE为偶联酶对ACS活性进行了测定.结果发现:AdhE的kcat为13.8 min-1,Ac-CoA和NADH的Km分别为52.8和73.4μmol·L-1;ACS的kcat为10.5 min-1,乙酸和ATP的Km分别为1.31和0.15 mmol·L-1.表明基于AdhE的Ac-CoA检测体系切实可用,为Ac-CoA合成反应的连续测定奠定了良好的基础.

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来源
《浙江师范大学学报（自然科学版）》 |2022年第1期|82-87|共6页
作者
孙梅好; 刘杰; 袁熹; 蒲首丞; 巩菊芳;
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作者单位

浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华 321004;

浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华 321004;

浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华 321004;

浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华 321004;

浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华 321004;

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正文语种 chi
中图分类 Q554.9;
关键词
醛醇脱氢酶; 原核表达; 乙酰辅酶A合成酶; 酶活偶联测定;

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