小鼠TSC21基因敲除打靶载体的构建和胚胎干细胞同源重组克隆的鉴定

殷正伟; 王朝亮; 张天标; 杨超; 张卫星

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小鼠TSC21基因敲除打靶载体的构建和胚胎干细胞同源重组克隆的鉴定

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目的:构建小鼠TSC21基因敲除打靶载体,电转胚胎干细胞(ES细胞)并筛选同源重组阳性克隆。方法:订购含TSC21基因的129 BAC克隆,PCR扩增2对同源臂,利用PL253、PL452质粒进行目的片段的连接和同源重组,构建打靶载体并电转ES细胞,利用Southern blot方法鉴定同源重组阳性ES细胞克隆。结果:构建了TSC21基因敲除打靶载体,经过限制性内切酶鉴定及DNA测序鉴定,TSC21基因敲除打靶载体构建成功。Southern blot结果显示成功筛选到打靶序列同源重组阳性ES细胞克隆。结论:TSC21基因敲除打靶载体构建成功并筛选到同源重组阳性ES细胞克隆。

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来源
《郑州大学学报：医学版》 |2018年第4期|511-515|共5页
作者
殷正伟; 王朝亮; 张天标; 杨超; 张卫星;
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作者单位

郑州大学第一附属医院泌尿外科;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类 R698.2;
关键词
TSC21; 基因敲除; 打靶载体; 同源重组; 小鼠;

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