GⅡ.17型诺如病毒样颗粒的制备及鉴定

王竹叶; 韩雪英; 王国川; 黄克; 李娜; 姚伦广; 刘阳坤

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GⅡ.17型诺如病毒样颗粒的制备及鉴定

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[背景]诺如病毒(Norovirus,NoV)是引发全球人类急性胃肠炎的主要食源性致病原,具有广泛的遗传多样性,其中GⅡ.17型是亚洲地区的优势流行株,危害最为严重。研究表明,通过基因工程技术制备的诺如病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)具有良好的免疫保护作用,是目前NoV疫苗研发的主要思路。[目的]利用大肠杆菌(Escherichia coli)原核表达系统制备GⅡ.17型诺如病毒的VLP,为GⅡ.17型NoV疫苗的研发奠定基础。[方法]合成GⅡ.17型NoV衣壳蛋白VP1的基因并克隆入pET28a-MsyB原核表达质粒中,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,通过烟草蚀纹病毒(tobacco etch virus,TEV)蛋白酶去除融合标签,利用His-Tag镍柱纯化获得天然VP1蛋白,利用SDS-PAGE、Western Blot和透射电镜对纯化后的VP1蛋白反应原性及其形成的结构进行初步鉴定。[结果]MsyB-VP1融合蛋白能够以可溶形式大量表达,其最适表达条件为:IPTG浓度0.8 mmol/L,37℃诱导8 h;TEV蛋白酶酶切后的VP1纯化蛋白能够与鼠抗GⅡ.17型NoV VP1多克隆抗体特异性结合,并能够自组装形成直径约为40 nm的病毒样颗粒。[结论]利用原核表达系统成功制备了GⅡ.17型诺如病毒VLP,有望成为GⅡ.17型诺如病毒的候选疫苗。

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来源
《微生物学通报》 |2022年第2期|483-491|共9页
作者
王竹叶; 韩雪英; 王国川; 黄克; 李娜; 姚伦广; 刘阳坤;
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作者单位

南阳师范学院生命科学与农业工程学院河南省畜禽保健品工程技术中心;

河南南阳473061;

西北农林科技大学动物医学院;

陕西杨凌712100;

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正文语种 chi
中图分类免疫学技术、设备及实验方法;
关键词
诺如病毒; GⅡ.17型; 病毒样颗粒; 原核表达;

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