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首页> 中文期刊> 《微生物学通报》 >布鲁氏菌对RAW264.7细胞内质网应激与细胞因子分泌的影响

布鲁氏菌对RAW264.7细胞内质网应激与细胞因子分泌的影响

         
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摘要

[Objective] It is important to study the pathogenesis and molecular mechanism how Brucella interacts with host cells.Many researches focus on the regulation of endoplasmic reticulum (ER) stress on the infection and inflammation.Brucella species replicate within host cells in the form of ER-derived vacuoles.The mechanisms by which the bacteria are sequestered into such vacuoles and obtain a continuous membrane supply for their replication remain unclear.To reveal the effect of B.suis S2 on ER stress and the excretion of cytokines in RAW264.7 cells.[Methods] We built an infection model of B.suis S2 using RAW264.7 cells,and detected the expression of GRP78 and CHOP,the makers of endoplasmic reticulum (ER) stress,through real time quantitative PCR (qPCR)and Western blot.We measured cytokines TNF-α,IL-1β and IL-6 via qPCR and ELISA at different intervals after infection.[Results] The optimal MOI used in the infection model was 100:1.Most B.suis S2 were killed during the first 4 to 6 h after they invaded into RAW264.7 cells,then the survived bacteria could reproductive,inducing the apoptosis at 24 h,and necrosis at 48 h.The invasion and reproduction of B.suis S2 increased the expression of GRP78 significantly,causing ER stress of RAW264.7 cells,and decreased the expression of TNF-α,IL-1β and IL-6.[Conclusion] ER stress was involved in the control ofB.suis S2 infection in RAW264.7 cells.%[目的]布鲁氏菌与宿主相互作用的分子机制是目前的研究热点之一,布鲁氏菌通过形成来自于内质网的布氏小体而在巨噬细胞内生存和增殖,其机制目前尚不清楚,宿主细胞内质网应激反应对病原感染和炎症的调控密切相关.揭示内质网应激反应在布鲁氏菌感染巨噬细胞中的作用以及布鲁氏菌感染对巨噬细胞分泌免疫因子的影响.[方法]构建布鲁氏菌感染RAW264.7模型,在感染后不同时间收集细胞,通过实时荧光定量PCR检测细胞内质网应激反应标志分子GRP78和CHOP,以及TNF-α、IL-1β和IL-6在mRNA水平的变化;通过Western blot和ELISA分别检测其蛋白水平的变化.[结果]布鲁氏茵感染RAW264.7细胞的最佳感染复数MOI为100∶1;证明在布鲁氏菌感染4-6 h,巨噬细胞可杀伤侵入的布鲁氏菌,之后存活的细菌可在细胞内增殖;感染后24 h出现细胞凋亡,48 h出现大量细胞坏死.布鲁氏茵感染可激活RAW264.7细胞的内质网应激反应,促进GRP78的表达,同时,抑制免疫因子的分泌.[结论]内质网应激反应参与了RAW264.7对布鲁氏菌感染的调节.

著录项

  • 来源
    《微生物学通报》 |2017年第12期|2896-2904|共9页
  • 作者

    尹彦龙; 李杨; 白芙蓉; 相彩霞; 雷兰杰; 支飞杰; 王爱华;

  • 作者单位

    西北农林科技大学动物医学院农业部动物生物技术重点实验室 陕西杨凌712100;

    西北农林科技大学动物医学院农业部动物生物技术重点实验室 陕西杨凌712100;

    西北农林科技大学动物医学院农业部动物生物技术重点实验室 陕西杨凌712100;

    西北农林科技大学动物医学院农业部动物生物技术重点实验室 陕西杨凌712100;

    西北农林科技大学动物医学院农业部动物生物技术重点实验室 陕西杨凌712100;

    西北农林科技大学动物医学院农业部动物生物技术重点实验室 陕西杨凌712100;

    西北农林科技大学动物医学院农业部动物生物技术重点实验室 陕西杨凌712100;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类
  • 关键词

    布鲁氏菌S2株; RAW264.7细胞; 内质网应激; GRP78; CHOP; 细胞因子;

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