金黄色葡萄球菌A型肠毒素双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用

时玉菲; 章先; 谢珲; 王歆; 方维焕

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[目的]建立一种快速、灵敏、特异的金黄色葡萄球菌A型肠毒素(Staphylococcal enterotoxinA,SEA)检测方法.[方法]以原核表达的可溶性重组SEA蛋白为免疫原,获得特异性强、亲和力高的单克隆抗体作为捕获抗体,同时制备抗SEA兔多抗血清作为检测抗体建立双抗体夹心ELISA (Double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA)检测方法.[结果]该方法对SEA的线性检测区间为2-128 μg/L (y=1.102x-0.07,R2=0.994),检测下限为1.89 μg/L,与SEB、SEC2和SED之间无交叉反应;鲜奶SEA人工污染试验测定回收率为94％-114％,变异系数小于10％.应用该方法对46株金黄色葡萄球菌水产品分离株和164株奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌分离株的体外培养上清进行检测,阳性率分别为4.4％和50.6％,表明SEA污染普遍存在.[结论]建立的DAS-ELISA方法特异性、灵敏度和稳定性好,为检测SEA的食源性污染提供了有效手段.

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来源
《微生物学通报》 |2016年第3期|687-694|共8页
作者
时玉菲; 章先; 谢珲; 王歆; 方维焕;
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作者单位

浙江大学动物科学学院浙江省动物预防医学重点实验室浙江杭州 310058;

浙江大学动物科学学院浙江省动物预防医学重点实验室浙江杭州 310058;

浙江大学动物科学学院浙江省动物预防医学重点实验室浙江杭州 310058;

浙江大学动物科学学院浙江省动物预防医学重点实验室浙江杭州 310058;

浙江大学动物科学学院浙江省动物预防医学重点实验室浙江杭州 310058;

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关键词
金黄色葡萄球菌A型肠毒素; 单克隆抗体; 双抗体夹心ELISA;

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