黄鳍金枪鱼抗菌肽YFGAP在大肠杆菌中融合表达及其活性检测

李慧; 陈云华; 张光亚; 李夏兰

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[目的]抗菌肽YFGAP由32个氨基酸组成,分子量为3.4 kD,对革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)表现出强效的抑制作用,不具有溶血活性.在大肠杆菌中表达抗菌肽YFGAP,分离纯化抗菌肽并鉴定其生物学活性.[方法]化学合成EK-YFGAP和L-EK-YFGAP基因序列,构建表达载体pET22b-ELP20-EK-YFGAP、pET22b-ELP40-EK-YFGAP和pET22b-ELP40-L-EK-YFGAP,分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,可逆相变循环纯化融合蛋白.肠激酶酶切,经Vivaspin Turbo纯化柱纯化,测定重组抗菌肽的抑菌活性和溶血活性.[结果]纯化出两种融合蛋白ELP40-EK-YFGAP和ELP40-L-EK-YFGAP,肠激酶酶切纯化后获得重组抗菌肽YFGAP,对4种病原菌均有抑制效果,溶血活性较低. [结论]以ELPs作为非色谱纯化标签,实现了抗菌肽YFGAP的融合表达,具有操作简单、成本低、易于扩大的优势,为重组抗菌肽的量化制备及应用提供了理论基础和技术支持.

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来源
《微生物学通报》 |2015年第9期|1745-1751|共7页
作者
李慧; 陈云华; 张光亚; 李夏兰;
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作者单位

华侨大学化工学院福建厦门 361021;

华侨大学化工学院福建厦门 361021;

华侨大学化工学院福建厦门 361021;

华侨大学化工学院福建厦门 361021;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
抗菌肽; 类弹性蛋白; 融合蛋白; 抑菌活性;

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