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脱氮硫杆菌特异引物/探针的设计和评价

         

摘要

自脱氮硫杆菌(Thiobacillus denitrificans)16S rRNA基因V3可变区中发现一条27 bp的特异序列,以该序列为反向引物,对高效同步脱硫反硝化系统污泥DNA进行了温度梯度PCR扩增和基因文库构建,结果证实了该引物的高度专一性.应用该探针在去离子甲酰胺和NaCl的浓度分别为35%和100 mmol/L,杂交/洗脱温度为48℃条件下对污泥样品杂交得到较好的阳性结果,软件分析表明脱氮硫杆菌在污泥中约占15%.脱氮硫杆菌专一性引物/探针的提出,将为不同生态环境中该种微生物的时空分布,结构动态以及实时定量等研究提供分子生物学工具.

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