纯化标签的不同位置对Δ6脂肪酸脱饱和酶异源表达的影响

崔洁; 陈海琴; 唐鑫; 张灏; 陈永泉; 陈卫

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纯化标签的不同位置对Δ6脂肪酸脱饱和酶异源表达的影响

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[背景]目前利用酵母表达系统已鉴定了多种物种中的Δ6脂肪酸脱饱和酶(FADS6).由于FADS6是一种具有多个跨膜螺旋的膜蛋白,使得其大量表达和纯化具有挑战性.[目的]探索FADS6的高效表达策略,研究纯化标签添加的位置对高山被孢霉FADS6I (MaFADS6I)重组表达效率的影响.[方法]在毕赤酵母表达载体中插入串联亲和标签HRV 3C-Protein A-His,利用改造后的载体构建带有N端或C端标签的MaFADS6I表达载体;通过电转化获得毕赤酵母重组表达菌株;利用斑点印迹杂交(Dot Blot)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis,SDS-PAGE)和免疫印迹(Westem Blot)分析重组蛋白的表达水平,并利用气相色谱-质谱(Gas Chromatography-Mass Spectrometry,GC-MS)分析检测MaFADS6I催化生成的脂肪酸.[结果]通过大量的毕赤酵母转化子筛选,最终获得高效表达MaFADS6I的毕赤酵母重组菌,证实各转化子的表达具有差异性,MaFADS6I的C端带有纯化标签较N端更有利于表达.[结论]在MaFADS6I的C端添加纯化标签比在N端添加更有利于该蛋白在酵母系统中的表达以及底物的转化,为进一步探究FADS6高效表达和结构功能奠定了基础.

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来源
《微生物学通报》 |2021年第8期|2607-2618|共12页
作者
崔洁; 陈海琴; 唐鑫; 张灏; 陈永泉; 陈卫;
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作者单位

江南大学食品学院江苏无锡214122;

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江南大学食品学院江苏无锡214122;

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正文语种 chi
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关键词
ω-3多不饱和脂肪酸; Δ6脂肪酸脱饱和酶; 毕赤酵母表达系统; 纯化标签;

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