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逆转录病毒载体介导IL-6基因修饰大肠癌细胞的抗瘤效应

         

摘要

目的:将外源性IL-6基因导入大肠癌细胞,建立IL-6基因表达株,观察IL-6转基因表达对大肠癌细胞的体内外抑制作用.方法:参照分子克隆技术将构建成功的重组逆转录病毒载体pZIPIL-6cDNA转染PA317包装细胞,以G418筛选抗性细胞,常规制备重组病毒液并感染大肠癌HT-29细胞,采用Northern Blot分析基因转录水平,ELISA法和MTT显色法检测蛋白表达的量与活性,以细胞生长曲线和集落形成实验以及裸鼠移植瘤实验观察转导株的体内外抑瘤作用.结果:制备了高滴度的重组病毒液(5.1×105cfu/ml),建立了稳定表达IL-6的转导细胞(HT-29IL-6),表达的量与活性分别为1132.5pg/ml/106cells 24h与150U/ml,转导株的细胞群体倍增时间为2.5天,对数生长期在4~7天之间,集落形成率和抑制率分别是2.21%和50%,接种裸鼠皮下的出瘤时间为13.5天,最终瘤体直径在6.5~8.5mm之间,移植瘤标本镜下可见大量凋亡细胞,以上结果与非转导株HT-29细胞相比,均有显著差异.结论:通过逆转录病毒载体的介导,IL-6基因能稳定整合在靶细胞染色体并进行有效的转录表达,IL-6转基因表达可明显抑制大肠癌细胞的体外增殖和体内移植瘤的形成与发展.

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