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首页> 中文期刊> 《现代消化及介入诊疗》 >miR-1180基因沉默介导Wnt通路增强人结肠癌耐药细胞株THC8307/L-OHP化疗的敏感性

miR-1180基因沉默介导Wnt通路增强人结肠癌耐药细胞株THC8307/L-OHP化疗的敏感性

         
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目的探讨微小核糖核酸-1180(miR-1180)基因沉默介导Wnt通路增强人结肠癌耐药细胞株THC8307/奥沙利铂(L-OHP)化疗敏感性的作用。方法设计并构建miR-1180 inhibitor、NC inhibitor慢病毒载体,采用脂质体转染法将其转染至人结肠癌耐药细胞株THC8307/L-OHP内,分别记为沉默组和对照组,另取未转染细胞记为空白组,每组6个复孔。转染48 h后,荧光显微镜下观察计算沉默组和对照组细胞转染效率。分别在细胞培养液中加入0、3.13、6.25、12.5、25、50μmol/mL的L-OHP作用48 h,噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力和对L-OHP的半数抑制浓度(IC_(50));流式细胞术检测各组细胞凋亡率;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞miR-1180表达及Wnt、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、多药耐药基因1(MDR1)、抗凋亡因子(Bcl-2)信使核糖核酸(mRNA)表达;蛋白质免疫印迹法(WB)检测各组细胞Wnt、β-catenin、CyclinD1、MDR1、Bcl-2蛋白表达;双荧光素酶活性实验验证miR-1180靶向调控Wnt。结果对照组和沉默组转染效率分别为(93.51±1.89)%、(94.09±2.26)%。与空白组和对照组比,沉默组细胞活力、IC_(50)值降低,细胞凋亡率升高,差异均有统计学意义(P0.05);与空白组和对照组比,沉默组miR-1180表达、Wnt、β-catenin、CyclinD1、MDR1、Bcl-2mRNA及蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论miR-1180基因沉默可显著降低人结肠癌耐药细胞株THC8307/L-OHP的细胞活力,提高化疗敏感性,推测是通过靶向Wnt信号通路,抑制Wnt、β-catenin、CyclinD1、MDR1、Bcl-2的表达实现此作用的。

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