年轻与老年小鼠血管内皮细胞microRNA的差异表达

张俊斌; 朱小南; 崔进; 陈鹏; 王深明; 王劲松

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年轻与老年小鼠血管内皮细胞microRNA的差异表达

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目的观察年轻与老年小鼠血管内皮细胞（EC）microRNA（miRNA）表达差异及意义。方法原代分离并培养雄性C57BL/6J小鼠年轻和老年EC,免疫组化Ⅷ因子染色对EC进行鉴定,体外比较年轻和老年EC增殖速度,采用miRNA基因芯片分析年轻与老年EC内miRNA表达差异谱,荧光定量PCR（qRT-PCR）进行验证。免疫印迹（Western blot）检测EC内皮细胞型一氧化氮合成酶（eNOS）表达。结果免疫组化Ⅷ因子染色证实原代分离的细胞为EC;在0.5%、1%、5%、10%、20%血清浓度下,MTT比色法测得年轻EC的吸光度值（A值）分别为0.260±0.006、0.350±0.011、0.404±0.027、0.519±0.034、0.590±0.040;老年EC的A值分别为0.360±0.011、0.480±0.019、0.532±0.025、0.641±0.036、0.710±0.038,发现老年EC增殖速度比年轻EC快（P＜0.05）;排除性别差异,经miRNA基因芯片,qRT-PCR证实miR-135a、miR-182、miR-96、miR-31、miR-126-3p和miR-362-5p在年轻EC表达上调（表达差异倍数分别为34.5±1.8、5.4±1、12.8±1、3.1±0.6和14.5±1.1）,miR-335-3p和miR-335-5p在老年EC表达上调,表达差异倍数分别为3.3±0.6和2.1±0.3;其中,老年EC内miR-335-3p的上调,年轻EC内miR-135a,miR-96上调可能与老年EC内eNOS表达降低相关。结论随年龄增长,EC的miRNA发生变化,调节EC内的基因表达,与衰老相关。

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来源
《中华医学杂志》 |2012年第31期||共页
作者
张俊斌; 朱小南; 崔进; 陈鹏; 王深明; 王劲松;
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作者单位

1. 中山大学附属第一医院血管外科 2. 中山大学基础医学院;

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正文语种 chi
中图分类病理生理学;
关键词
老年; 血管内皮细胞; microRNA; 内皮细胞型一氧化氮合成酶;

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