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感觉神经肽P物质激活Wnt/β-catenin信号通路促进间充质干细胞增殖的实验研究

         
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目的 探讨感觉神经肽P物质(substance P,SP)对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖的影响并初步揭示其中可能的机制.方法 体外培养SD(Sprague-Dawley)大鼠BMSCs.细胞增殖-毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测不同浓度SP刺激下的BMSCs增殖活性;在10-8 mol/L的SP刺激下,采用实时荧光定量PCR(real-time qPCR,RT-qPCR)检测第1、3、5和7天时Wnt/β-catenin信号通路相关基因(β-catenin、c-myc、cyclin D) 的表达情况.SP组单纯添加10-8 mol/L的SP,SP+ LiCl(糖原合成激酶-3的抑制剂LiCl)组在SP组基础上添加6×10-3 mol/L的LiCl,SP+ Dkk-1 (Dickkopf-1)组在SP组基础上添加10-9 mol/L的Dkk-1,以添加等量聚丁烯琥珀酸酯(poly butylenes succinate,PBS)为空白对照组.结果 CCK-8法显示SP明显促进BMSCs增殖,以10 8 mol/L的SP作用最为显著.RT-qPCR结果显示SP刺激下,β-catenin、c-myc、cyclin D的mRNA表达有显著差异,10-8 mol/L的浓度差异最为显著,并且呈明显的时间依赖,第5天mRNA表达出现顶峰.并且SP+ LiCl组-catenin、c-myc、cyclin D的mRNA和蛋白水平显著增强,而SP+ Dkk-1组明显抑制.结论 SP通过激活Wnt/β-catenin通路而显著促进BMSCs增殖.

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