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不同脊髓灰质炎病毒株3CD蛋白酶在昆虫细胞中的表达及其对P1前体蛋白的剪切

         
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摘要

目的 获得在昆虫细胞中有效表达脊髓灰质炎病毒P1基因和3CD基因的重组杆状病毒,为制备脊髓灰质炎病毒样颗粒疫苗提供了科学依据.方法 将I型脊髓灰质炎病毒( Mahoney株) 的P1基因和3CD基因构建到供体质粒中,通过flashBAC ULTRATM系统制备重组杆状病毒;将Mahoney株的P1基因与Sabin株Ⅲ 型的3CD基因组合,用同样方法构建重组杆状病毒.通过接种昆虫细胞草地贪夜蛾细胞( sf-9细胞) 对两种病毒进行扩增,再接种昆虫细胞粉纹夜蛾细胞( High five细胞) 扩大培养,并通过定量PCR对P1和3CD基因的表达进行验证,利用Western blot检测P1蛋白的表达及被3CD蛋白酶剪切的情况.结果 获得了两株稳定表达脊髓灰质炎病毒P1和3CD基因的重组杆状病毒.其中,重组杆状病毒( BacU-Mahoney-P1-3CD) 在感染细胞后,3CD蛋白酶表达量较低,不能有效剪切P1前体蛋白;而重组杆状病毒( BacU-Mahoney-P1-Sabin PV3 3CD) 感染细胞后,3 CD蛋白酶的表达量和对P1前体蛋白的剪切效力都有明显提高( P＜0.05).结论将Mahoney株P1基因和Sabin株Ⅲ 型的3CD基因的组合构建重组杆状病毒,可有效地在昆虫细胞中表达P1和3CD基因,并且Sabin株Ⅲ 型的3CD蛋白酶可有效地剪切Mahoney株的P1前体蛋白.%Objective To generate recombinant baculoviruses which can be used to express both poliovirus P1 and 3CD genes in insect cells, so as to provide a scientific basis in preparation of virus-like particles ( VLPs) vaccine in control of poliomyelitis. Methods Two recombinant baculoviruses were constructed using the flashBAC ULTRATM vector system. The viruses carried either the Mahoney P1 /3CD genes or the Mahoney P1 / Sabin type Ⅲ 3CD genes. Transcription levels of the P1 and 3CD genes were determined by quantitative real-time reverse transcription PCR. Expression of the P1 precursor protein and the cleavage of the P1 precursor protein by the 3CD protease were confirmed by Western blot. Results Two recombinant baculoviruses, BacU-Mahoney-P1-3CD and BacUMahoney-P1-Sabin type Ⅲ 3CD, were successfully generated. The insect cells infected with BacU-Mahoney-P1-Sabin PV3 3CD showed good expression of both P1 precursor protein and 3CD protease, resulting in efficient cleavage of P1 precursor protein by the 3CD protease. Conclusion Mahoney P1 gene and Sabin type Ⅲ 3CD gene were co-expressed in insect cells. The 3CD protease of Sabin type Ⅲ strain could efficiently cleave the P1 precursor protein from the Mahoney strain.

著录项

  • 来源
    《微生物学免疫学进展》 |2018年第1期|1-6|共6页
  • 作者

    马金; 李军强; 莘春林; 段静留; 朱涛;

  • 作者单位

    天津经济技术开发区博士后科研工作站康希诺生物股份公司分站,天津市呼吸道细菌重组及结合疫苗企业重点实验室,康希诺生物股份公司,天津 300457;

    天津科技大学生物工程学院,天津 300457;

    天津经济技术开发区博士后科研工作站康希诺生物股份公司分站,天津市呼吸道细菌重组及结合疫苗企业重点实验室,康希诺生物股份公司,天津 300457;

    天津经济技术开发区博士后科研工作站康希诺生物股份公司分站,天津市呼吸道细菌重组及结合疫苗企业重点实验室,康希诺生物股份公司,天津 300457;

    天津科技大学生物工程学院,天津 300457;

    天津经济技术开发区博士后科研工作站康希诺生物股份公司分站,天津市呼吸道细菌重组及结合疫苗企业重点实验室,康希诺生物股份公司,天津 300457;

    天津科技大学生物工程学院,天津 300457;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 脊髓灰质炎（小儿麻痹症）;
  • 关键词

    脊髓灰质炎病毒; 草地贪夜蛾细胞; 3CD蛋白酶; P1前体蛋白; 重组杆状病毒; 类病毒颗粒;

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