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分子信标用于活细胞内源性mRNA检测的实验研究

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目的:观察分子信标(molecular beacons,MB)在活细胞内及在体水平对内源性mRNA检测的可行性.方法:合成增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,eGFP)的MB,模拟体内条件,分别从MB的稳定性、与目标基因结合的特异性和敏感性进行检测,并通过在活细胞和斑马鱼胚胎内的应用来观察其对内外源性mRNA的检测的可行性.结果:MB在37℃条件下在体外48小时内经琼脂糖凝胶电泳鉴定未见降解,熔解曲线结果显示荧光强度差异无统计学意义(P＞0.05);并且只有在靶序列存在的条件下MB的信号强度显著增强,MB的信号强度与靶基因浓度呈正相关并能基本稳定存在;经eGFP和靶向eGFP的MB共转染的293T细胞能看到荧光表达,靶向eGFP的MB可特异性结合细胞内eGFP的mRNA;在单细胞期斑马鱼胚胎内共注射MB以及目标单链后能观察到荧光表达.结论:结果表明分子信标可用于活细胞内内源性mRNA的检测.

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来源
《现代生物医学进展》 |2016年第17期|3227-3231|共5页
作者
何蓉蓉; 丁雪燕; 陈丹峰; 宋婧文; 荆清;
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作者单位

上海长海医院心血管内科上海200043;

上海浦东新区公利医院上海200135;

上海长海医院心血管内科上海200043;

中国人民解放军第一一七医院心血管中心浙江杭州310002;

上海长海医院心血管内科上海200043;

上海长海医院心血管内科上海200043;

上海长海医院心血管内科上海200043;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类实验医学、医学实验;应用生物化学;
关键词
分子信标(MB); 内源性; 熔解曲线; SLO; 斑马鱼;

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