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基于ITS序列位点特异性PCR鉴别北柴胡掺伪藏柴胡

         

摘要

目的 基于ITS序列建立北柴胡掺伪藏柴胡的分子鉴别方法.方法 收集北柴胡、藏柴胡样品,提取基因组DNA,用ITS通用引物进行测序,通过DNAMAN软件进行序列比对,根据藏柴胡特异性位点用Primer Premier 5.0软件设计特异性鉴别引物,并优化特异性PCR反应条件.结果 在位点特异性PCR反应条件考查中,退火温度为65°C(20 s)、引物量为0.4 μL、循环次数为30时特异性最佳,该方法适用于不同DNA聚合酶且重现性较好,掺伪检出限为1%.结论 该研究设计的位点特异性引物在一定条件下的PCR反应中,仅藏柴胡可以扩增出425 bp大小的条带,北柴胡则不能扩增出条带,能够鉴别北柴胡中掺伪藏柴胡.

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