人Kai-1基因真核表达载体的构建及其体外表达

张健; 吕飒美; 赵素平; 党珊; 何小勤; 陈倩; 易默; 史丽萍

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人Kai-1基因真核表达载体的构建及其体外表达

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克隆人Kai-1基因,构建其真核表达载体,并在体外细胞系中进行表达验证.提取人正常肝细胞系HL7702的总RNA,通过RT-PCR其反转录为cDNA;以该cDNA为模板,通过PCR扩增出Kai-1基因的编码区,将该目的片段纯化后亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1 myc-his(-)中,利用菌落PCR及DNA测序分别对Kai-1基因编码区的大小及序列进行鉴定.将所构建的重组质粒通过脂质体瞬时转染Hela细胞,48 h后裂解细胞,利用Western blot检测有无目的蛋白的表达.测序证实所克隆的Kai-1编码区cDNA正确地插入pcDNA3.1 myc-his(-)中,经Westemblot检测证实其在Hela细胞中得到表达.成功克隆了人Kai-1 cDNA,构建了其真核表达载体,并在Hela细胞中得到有效表达,为进一步研究Kai-1的功能奠定了基础.

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来源
《科学技术与工程》 |2014年第33期|16-19|共4页
作者
张健; 吕飒美; 赵素平; 党珊; 何小勤; 陈倩; 易默; 史丽萍;
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作者单位

陕西省人民医院消化内二科,西安710068;

陕西省人民医院消化内二科,西安710068;

陕西省人民医院消化内二科,西安710068;

陕西省人民医院消化内二科,西安710068;

陕西省人民医院消化内二科,西安710068;

陕西省人民医院消化内二科,西安710068;

陕西省人民医院消化内二科,西安710068;

陕西省人民医院消化内二科,西安710068;

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正文语种 chi
中图分类生物信息、生物控制;
关键词
Kai-1; 真核表达; 克隆; cDNA;

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