植物组织和单头蚜虫中柑橘衰退病毒的快速分子检测技术

刘永清; 曹孟籍; 王雪峰; 李中安; 唐科志; 周常勇

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植物组织和单头蚜虫中柑橘衰退病毒的快速分子检测技术

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[目的]探寻一种快速、简便、灵敏而可靠的检测植物组织和单头蚜虫中柑橘衰退病毒的方法.[方法]运用反转录多聚酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、反转录巢式多聚酶链式反应(reverse transcription nested polymerase chain reaction,RT-nested-PCR),印记捕获反转录巢式多聚酶链式反应(print capture reverse transcription nested polymerase chain reaction,PC-RT-nested-PCR)方法检测接种Citrus tristeza virus(CTV)四年以上的柚以及采用挤压捕获反转录巢式多聚酶链式反应(squash capture reverse transcription nested polymerase chain reaction,SC-RT-nested-PCR)检测单头蚜虫中CTV,并比较几种方法的检出率、灵敏度以及SC-RT-nestod-PCR方法的有效性.[结果]对染病柚的总核酸或印迹稀释后检测,RT-PCR、RT-nested-PCR、PC-RT-nested-PCR的检测限分别为10~(-3)、10~(-5)和10~(-1)倍.用质粒梯度稀释后模板进行nested-PCR检测,灵敏度达到13-14拷贝·μL~(-1).饲毒一周后的蚜虫经SC-RT-nested-PCR检测,除在健康琯溪蜜柚上饲喂的蚜虫未检测到目标条带外,其余在感病琯溪蜜柚上饲喂的蚜虫体内都获得132 bp的目标片段.[结论]PC-RT-nested-PCR和RT-nosted-PCR方法具有相同的检出率,SC-RT-nested-PCR检测单头蚜虫非常有效,PC-RT-nested-PCR和SC-RT-nested-PCR都勿需提取核酸,适用于柑橘苗木和接穗的无毒认证以及柑橘衰退病的流行监测和蚜传机理研究.

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来源
《中国农业科学》 |2010年第7期|1397-1403|共7页
作者
刘永清; 曹孟籍; 王雪峰; 李中安; 唐科志; 周常勇;
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作者单位

西南大学植物保护学院;

重庆;

400716;

中国农业科学院柑橘研究所;

重庆;

400712;

湖北民族学院;

湖北恩施;

445000;

西南大学植物保护学院;

重庆;

400716;

中国农业科学院柑橘研究所;

重庆;

400712;

中国农业科学院柑橘研究所;

重庆;

400712;

中国农业科学院柑橘研究所;

重庆;

400712;

中国农业科学院柑橘研究所;

重庆;

400712;

西南大学植物保护学院;

重庆;

400716;

中国农业科学院柑橘研究所;

重庆;

400712;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
柑橘衰退病毒; 分子检测; 植物组织; 单头蚜虫;

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