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入侵性致瘿害虫桉树枝瘿姬小蜂(膜翅目:姬小蜂科)EST-SSR开发及隐种鉴定

         
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[目的] 对入侵性致瘿害虫桉树枝瘿姬小蜂(膜翅目:姬小蜂科)进行 EST-SSR引物开发和隐种鉴定,为桉树枝瘿姬小蜂种群遗传学研究及其防治提供理论依据.[方法] 采用 Illumina HiSeqTM 2000 测序平台对 3个地理种群的桉树枝瘿姬小蜂雌性成虫进行转录组测序,利用 MISA和 Primer Premier 3软件进行 EST-SSR 标记的搜索、挖掘和引物设计.选取 400对 EST-SSR引物,结合国外报道的 14对多态性 G-SSR引物,应用 1%琼脂糖凝胶电泳检测扩增效率,并用 8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳验证引物多态性.基于桉树枝瘿姬小蜂 COI 基因序列数据对我国 14 个地理种群 320 个桉树枝瘿姬小蜂雌性成虫样本进行隐种鉴定.[结果] 1 ) 共获得277 048 525条 clean reads,包括 82. 86 G个核苷酸,组装后得到44 878个 unigene,平均长度 1 082. 76 bp,N50 为1 976 bp; 利用 MISA软件搜索到 EST-SSR位点14 190个,其中主要重复类型是单核苷酸重复(占总 EST-SSR 的69. 63%) ,其次是二核苷酸重复和三核苷酸重复(分别占总 EST-SSR 的 16. 17%、13. 51%). 2) 400 对 EST-SSR引物中有 205对引物可有效扩增出目的片段,扩增效率 51. 25% ,国外报道的 14 对 G-SSR 引物均能扩增出目的片段; 3) 用 8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳验证 SSR引物多态性,最终筛选出 10 对多态性良好的 EST-SSR 引物,国外报道的 14对 G-SSR引物中仅有 LiSS2、LiSS5、LiSS13在我国桉树枝瘿姬小蜂样本中存在多态性; 4) 从我国14个桉树枝瘿姬小蜂地理种群中共获得 320条 605 bp 的 COI 基因序列,基于桉树枝瘿姬小蜂 COI 基因序列构建的 NJ系统发育树表明,我国仅存在 A、B 2种类型的桉树枝瘿姬小蜂隐种,样本比例约为 1 ∶ 2.[结论] 筛选出 10对适合我国桉树枝瘿姬小蜂种群遗传学研究的 EST-SSR引物.我国存在 A、B 2种类型的桉树枝瘿姬小蜂隐种,其中隐种 A首次在我国发现,桉树枝瘿姬小蜂的隐种鉴定可为该害虫在生物防治中采用正确的生物型提供依据.

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