增强型绿色荧光蛋白的基因克隆、表达及蛋白纯化

曲萍; 隋延仿; 叶菁; 张秀敏

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增强型绿色荧光蛋白的基因克隆、表达及蛋白纯化

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目的:研究增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)基因在大肠杆菌中的基因克隆、重组表达及纯化.方法:采用PCR方法克隆EGFP全长cDNA序列,构建原核表达载体pGEX4T-1-EGFP,经过DNA序列测定证实其序列正确,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,通过异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,用谷胱甘肽-Sepharose 4B层析法纯化GST-EGFP融合蛋白.结果:成功地克隆了EGFP全长cDNA序列,并进行原核表达以及蛋白的纯化,GST-EGFP的表达量占菌体蛋白量的40%以上.经纯化后纯度高于90%.菌体超声裂解后上清液及其纯化产物在长波紫外线的照射下,发出明亮的绿色荧光.结论:本研究为应用EGFP追踪细胞吞噬功能等动态活动奠定了实验基础.

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来源
《陕西医学杂志》 |2006年第10期|1235-1237|共3页
作者
曲萍; 隋延仿; 叶菁; 张秀敏;
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作者单位

第四军医大学基础医学教学实验中心,西安,710033;

第四军医大学基础医学教学实验中心,西安,710033;

第四军医大学基础医学教学实验中心,西安,710033;

第四军医大学基础医学教学实验中心,西安,710033;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基础医学;
关键词
基因复制; 基因表达调控; @增强型绿色荧光蛋白;

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