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Flk1胞外1-3区基因的克隆及核酸疫苗的构建

         

摘要

目的:克隆并构建小鼠Flk1胞外1-3区核酸疫苗,并检验疫苗引起特异性免疫反应的能力.方法:RT-PCR克隆Flk1胞外1-3区,构建核酸疫苗pcDNA3.1(+)-Flk1Domain1-3,脂质体转染COS7细胞,western-bolt检测表达;疫苗免疫小鼠;以小鼠血管内皮细胞为靶细胞,以免疫的小鼠脾细胞作为效应细胞,采用标准4h51Cr释放法计算CTL特异性杀伤率.结果:扩增出1252bp片段.疫苗DNA自动测序证明所荻基因片段序列阅读框架正确.Western-blot检测转染疫苗的COS7细胞显示细胞中有分子质量为44kDa的蛋白表达;疫苗组与对照组比较,CTL杀伤率差异有显著性.结论:pcDNA3.1(+)Flk1-Domain1-3核酸疫苗可有效的引起针对Flk1的免疫反应.

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