Homer1基因真核表达重组质粒构建及HT22细胞转染鉴定

曹敏; 张晓敏; 王培昌; 刘静

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目的构建Homer1基因真核表达重组质粒并在HT22细胞中转染和鉴定.方法提取APP/PS1双转基因小鼠海马组织总RNA,经逆转录、PCR扩增,获取Homer1基因编码序列,1％琼脂糖凝胶电泳分离后,将Ho-mer1基因序列插入p3×FLAG-CMV-10载体的多克隆位点区域,获得p3×FLAG-CMV-10-Homer1基因真核表达重组质粒,双酶切后鉴定重组质粒并进行基因测序.取HT22细胞,随机分为p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组、p3×FLAG-CMV-10空载体组、空白对照组,p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组、p3×FLAG-CMV-10空载体组分别转染p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒、p3×FLAG-CMV-10空载体,空白对照组不予转染.采用Western blotting法检测各组转染后Homer1蛋白表达.结果成功构建了p3×FLAG-CMV-10-Homer1基因真核表达重组质粒,经双酶切鉴定和基因测序,该重组质粒序列与目的基因序列一致.p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组Homer1蛋白相对表达量明显高于p3×FLAG-CMV-10空载体组、空白对照组(P均0.05.结论本研究成功构建了p3×FLAG-CMV-10-Ho-mer1基因真核表达重组质粒,并成功转染HT22细胞,这为研究Homer1蛋白对脑内Aβ清除的影响及在阿尔茨海默病发病机制中的作用奠定了基础.

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来源
《山东医药》 |2020年第22期|44-47|共4页
作者
曹敏; 张晓敏; 王培昌; 刘静;
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作者单位

首都医科大学宣武医院北京100053;

首都医科大学宣武医院北京100053;

首都医科大学宣武医院北京100053;

首都医科大学宣武医院北京100053;

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正文语种 chi
中图分类神经病学;转化及克隆;
关键词
阿尔茨海默病; Homer1基因; 真核表达重组质粒; 瞬时转染;

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