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芋花叶病毒RNA提取前处理方法优化及快速检测体系的构建

         

摘要

芋花叶病毒(Dasheen mosaic virus, DSMV)是芋在无性繁殖过程中不断积累并遗传的最为严重的一种植物病毒。为解决芋因受病毒侵染而导致的品种退化,构建快速且高效的芋花叶病毒RNA提取前处理及快速检测方法,本研究通过对芋叶总RNA提取前处理过程进行改良和优化,探究总RNA中DSMV的两步式RT-PCR、一步式RT-PCR及RT-qPCR快速检测体系。采用液氮联合组织研磨仪的植物总RNA提取前处理法,研磨时间20 min,研磨频率30(1/s),钢珠1个的最佳研磨条件,能获得含量纯度均较高的芋叶总RNA;一步式RT-PCR体系为总RNA模板1.0μL,10×PCR buffer 2.5μL,25 mM Mg1.0μL,2.5 mM dNTPs 1.0μL,10μmol/L上下游引物各1.0μL,200 U/μL逆转录酶0.5μL,5 U/μL Taq DNA聚合酶1.0μL,25.0μL总体系。一步式RT-PCR体系具有比两步式更快速、简便且灵敏的检测效果。

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