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反复超促排卵对老龄模型小鼠生殖能力的影响

         
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目的探索反复促排卵对老龄模型小鼠生殖功能的影响。方法30只7月龄雌性C57BL/6小鼠,按照随机数字表法分成对照组与模型组,模型组予孕马血清促性腺激素(PMSG)腹腔注射,隔48 h后注射人绒毛膜促性腺激素(hCG),每周1次,连续4周,建立反复超促排卵老龄模型小鼠;对照组仅在第4周注射PMSG、hCG促排卵。第4次促排卵16 h后检测对照组、模型组小鼠血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、抑制素B(INHB)水平;HE染色卵巢组织形态学变化,透射电镜观察颗粒细胞超微结构;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测卵巢c-Jun氨基末端激酶(JNK)、Bcl2关联X蛋白(Bax)、人体抑癌基因(p53)、叉形头转录因子O亚型(FOXO3a)等基因的表达;体式显微镜下观察卵母细胞形态并检测其活性氧(ROS)水平。结果与对照组比较,模型组小鼠血清E2、P、INHB均显著降低[E2:(33.71±5.64)pg/mL比(53.20±7.17)pg/mL,P:(9.07±2.13)ng/mL比(17.28±2.37)ng/mL;INHB:(18.10±4.73)pg/mL比(27.76±4.15)pg/mL,P均<0.01],卵巢原始卵泡[(3.83±0.75)个比(9.83±2.56)个,P<0.01]、发育卵泡[(1.33±0.82)个比(3.00±1.26)个,P<0.05]均减少,黄体数量显著增加[(8.67±1.21)个比(5.83±1.33)个,P<0.05];模型组小鼠卵巢颗粒细胞中嵴模糊[(24.96±2.24)%比(16.10±0.90)%,P<0.01]及空泡征的线粒体明显增多[(10.69±1.03)%比(3.19±0.90)%,P<0.01];模型组JNK、Bax、p53水平较对照组显著增加[JNK:(1.44±0.21)比(0.91±0.08);Bax:(1.15±0.10)比(0.93±0.03);p53:(1.30±0.10)比(0.93±0.06),P均<0.05],FOXO3a水平较对照组降低[(0.73±0.08)比(1.00±0.04),P<0.01];同时,模型组小鼠的卵母细胞碎裂率及ROS水平均显著增加(P<0.01)。结论经过4周连续超促排的老龄模型小鼠卵巢储备功能下降,可获得的卵子质量和数量减少,可能与连续超促排卵导致卵泡内ROS积聚,卵巢氧化应激水平激增,JNK、Bax、p53等凋亡相关基因表达增加,颗粒细胞线粒体功能紊乱有关。由过度氧化应激反应导致这一系列变化后最终导致老龄模型小鼠卵母细胞质量降低甚至碎裂。

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