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黄连素调控GRP78表达对内皮细胞新生血管的抑制作用

         
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目的 探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在内皮细胞新生血管中的表达及黄连素的干预作用.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),利用4-苯基丁酸(4-PBA)5mmol/L,毒胡萝卜素(TG)300nmol/L,TG 300nmol/L联合低、中、高剂量(50、75、100μmol/L)黄连素分别作用24h,对照组为正常培养的HUVEC.采用噻唑蓝(MTT)法、划痕法、Matrigel Matrix胶法分别检测细胞增殖、迁移、成血管能力,qRT-PCR法、Western blot法分别检测HUVEC中血管内皮生长因子(VEGF)、GRP78、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA和蛋白表达,免疫荧光法观察GRP78在细胞内的定位.结果 ≤100μmol/L的黄连素对HUVEC增殖无明显影响(P<0.05).与对照组比较,4-PBA组细胞迁移、成血管能力均明显减弱(均P<0.05);TG组细胞迁移、成血管能力均明显增强(均P<0.05),HUVEC中VEGF、GRP78、HIF-1αmRNA和蛋白相对表达量均明显升高(均P<0.05).与TG组比较,黄连素低、中、高剂量干预组细胞迁移、成血管能力均明显减弱(均P<0.05),HUVEC中VEGF、GRP78、HIF-1αmRNA和蛋白相对表达量均明显降低(均P<0.05).在荧光显微镜下观察,GRP78分布于内皮细胞的细胞膜上.结论 GRP78在HUVEC新生血管过程中发挥重要作用,黄连素可能通过抑制GRP78表达从而抑制内皮细胞血管新生.

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