miRNA-455-5p对人结肠癌HT-29细胞株PIK3R1基因靶向调控作用的研究

柯孔亮; 王金秋; 楼婷婷; 张鲁青; 缪淳迪; 郭宇

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cqvip:目的探讨miRNA-455-5p对人结肠癌HT-29细胞株磷脂酰肌醇三激酶调节亚单位α(PIK3R1)基因靶向调控的作用。方法培养HT-29细胞并用脂质体转染试剂进行转染,利用实时定量逆转录-聚合酶链反应、免疫印迹试验分别检测miRNA-455-5p上下调后PIK3R1及PI3K/AKT信号通路的PI3K下游效应分子(AKT1、MTOR)的基因及蛋白相对表达量。构建PIK3R1的3′非编码区(3′UTR)报告载体,利用双荧光素酶报告基因实验验证PIK3R1基因是否为miRNA-455-5p靶基因。结果与模拟剂对照组比较,上调miRNA-455-5p能抑制HT-29细胞中PIK3R1、AKT1、MTOR mRNA及蛋白的表达(均P<0.05);与抑制剂对照组比较,抑制miRNA-455-5p能促进HT-29细胞中PIK3R1、AKT1、MTOR mRNA及蛋白的表达(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验可获得测序验证正确的PIK3R1的3′UTR报告载体。hsa-miRNA-455-5p与psicheck3-gluc-_PIK3R1-3′UTR-WT_-fluc共转染293细胞48h后检测得到的分泌型荧光素酶/非分泌型荧光素酶(Gluc/Fluc)值较mimics-N与psicheck3-gluc-_PIK3R1-3′UTR-WT_-fluc共转染48h后得到的值明显降低(P<0.05)。结论miRNA-455-5p对人结肠癌HT-29细胞株PIK3R1基因存在负向调控作用,PIK3R1基因是miRNA-455-5p调控的靶基因。

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来源
《浙江医学》 |2020年第7期|650-655659|共7页
作者
柯孔亮; 王金秋; 楼婷婷; 张鲁青; 缪淳迪; 郭宇;
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作者单位

315336 宁波市杭州湾医院肛肠外科;

宁波市第一医院甲乳外科;

315336 宁波市杭州湾医院乳腺外科;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
结直肠癌; 逆转录; 靶基因; 生物学特性;

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