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首页> 美国卫生研究院文献>Breeding Science >Mutant selection in the self-incompatible plant radish (Raphanus sativus L. var. sativus) using two-step TILLING
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Mutant selection in the self-incompatible plant radish (Raphanus sativus L. var. sativus) using two-step TILLING

机译：使用两步耕作法对自交不亲和植物萝卜（Raphanus sativus L. var。sativus）进行突变选择

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Radish (Raphanus sativus L. var. sativus), a widely cultivated root vegetable crop, possesses a large sink organ (the root), implying that photosynthetic activity in radish can be enhanced by altering both the source and sink capacity of the plant. However, since radish is a self-incompatible plant, improved mutation-breeding strategies are needed for this crop. TILLING (Targeting Induced Local Lesions IN Genomes) is a powerful method used for reverse genetics. In this study, we developed a new TILLING strategy involving a two-step mutant selection process for mutagenized radish plants: the first selection is performed to identify a BC1M1 line, that is, progenies of M1 plants crossed with wild-type, and the second step is performed to identify BC1M1 individuals with mutations. We focused on Rubisco as a target, since Rubisco is the most abundant plant protein and a key photosynthetic enzyme. We found that the radish genome contains six RBCS genes and one pseudogene encoding small Rubisco subunits. We screened 955 EMS-induced BC1M1 lines using our newly developed TILLING strategy and obtained six mutant lines for the six RsRBCS genes, encoding proteins with four different types of amino acid substitutions. Finally, we selected a homozygous mutant and subjected it to physiological measurements.
机译：萝卜（Raphanus sativus L. var。sativus）是一种广泛种植的根菜类作物，具有较大的汇聚器官（根），这意味着可以通过改变植物的来源和汇聚能力来增强萝卜的光合活性。但是，由于萝卜是一种自交不亲和的植物，因此该作物需要改进的突变育种策略。 TILLING（靶向基因组中的诱导局部病变）是用于反向遗传学的有力方法。在这项研究中，我们开发了一种新的耕种策略，其中涉及诱变萝卜植物的两步突变选择过程：进行第一次选择以鉴定BC1M1系，即与野生型杂交的M1植物的后代，然后进行第二次选择执行步骤以鉴定具有突变的BC1M1个体。由于Rubisco是最丰富的植物蛋白和关键的光合作用酶，因此我们将Rubisco定位为目标。我们发现萝卜基因组包含六个RBCS基因和一个编码小Rubisco亚基的假基因。我们使用新开发的TILLING策略筛选了955个EMS诱导的BC1M1品系，并获得了六个RsRBCS基因的六个突变体品系，它们编码具有四种不同类型氨基酸取代的蛋白质。最后，我们选择了一个纯合突变体并对其进行了生理测量。

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