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首页> 美国卫生研究院文献>The EMBO Journal >Recombinant nidogen consists of three globular domains and mediates binding of laminin to collagen type IV.
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Recombinant nidogen consists of three globular domains and mediates binding of laminin to collagen type IV.

机译：重组多肽原由三个球状结构域组成介导层粘连蛋白与IV型胶原的结合。

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Recombinant mouse nidogen and two fragments were produced in mammalian cells and purified from culture medium without resorting to denaturing conditions. The truncated products were fragments Nd-I (positions 1-905) comprising the N-terminal globule and rod-like domain and Nd-II corresponding mainly to the C-terminal globule (position 906-1217). Recombinant nidogen was indistinguishable from authentic nidogen obtained by guanidine dissociation from tumor tissue with respect to size, N-terminal sequence, CD spectra and immunochemical properties. They differed in protease stability and shape indicating that the N-terminal domain of the more native, recombinant protein consists of two globules connected by a flexible segment. This established a new model for the shape of nidogen consisting of three globes of variable mass (31-56 kDa) connected by either a rod-like or a thin segment. Recombinant nidogen formed stable complexes (Kd less than or equal to 1 nM) with laminin and collagen IV in binding assays with soluble and immobilized ligands and as shown by electron microscopy. Inhibition assays demonstrated different binding sites on nidogen for both ligands with different specificities. This was confirmed in studies with fragment Nd-I binding to collagen IV and fragment Nd-II binding to laminin fragment P1. In addition, recombinant nidogen but not Nd-I was able to bridge between laminin or P1 and collagen IV. Formation of such ternary complexes implicates a similar role for nidogen in the supramolecular organization of basement membranes.
机译：在哺乳动物细胞中产生了重组的小鼠色素和两个片段，并从培养基中纯化出来，而无需采用变性条件。截短的产物是片段Nd-1（位置1-905），其包含N末端小球和杆状结构域以及主要对应于C末端小球（位置906-1217）的Nd-II。在大小，N端序列，CD谱图和免疫化学特性方面，重组腺苷与通过胍从肿瘤组织中解离而获得的真伪腈没有区别。它们在蛋白酶的稳定性和形状上有所不同，表明更天然的重组蛋白的N末端结构域由两个通过柔性片段连接的小球组成。这样就建立了一种由3个质量可变的球状体（31-56 kDa）组成的，由杆状或细段相连的硝化氢形状的新模型。在可溶性和固定化配体的结合试验中，重组电子原与形成层粘连蛋白和胶原蛋白IV形成稳定的复合物（Kd小于或等于1 nM），并通过电子显微镜观察。抑制试验表明，对于两种具有不同特异性的配体，在氮源上具有不同的结合位点。在研究中，片段Nd-I与胶原IV结合，片段Nd-II与层粘连蛋白片段P1结合，这在研究中得到了证实。此外，重组蛋白原而非Nd-1能够在层粘连蛋白或P1与胶原IV之间架桥。此类三元复合物的形成暗示着硝根在基底膜的超分子组织中的相似作用。

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