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首页> 美国卫生研究院文献>Nucleic Acids Research >RNA:DNA complex formation upon transcription of immunoglobulin switch regions: implications for the mechanism and regulation of class switch recombination.
【2h】

RNA:DNA complex formation upon transcription of immunoglobulin switch regions: implications for the mechanism and regulation of class switch recombination.

机译：RNA：DNA复合物在免疫球蛋白开关区域转录时的形成：对类开关重组的机制和调控的影响。

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Central the regulation and mechanism of class switch recombination is the understanding of the relationship between transcription and DNA recombination. We demonstrated previously, using mini-chromosome substrates, that physiologically oriented transcription is required for recombination to occur between switch regions. In this report, we demonstrate the formation of an RNA:DNA complex under in vitro transcription conditions for these same and other switch DNA fragments. We find that cell-free transcription of repetitive murine switch regions (Smu, S gamma 2b and S gamma 3) leads to altered DNA mobility on agarose gels. These altered mobilities are resistant to RNase A but sensitive to RNase H. Transcription in the presence of labeled ribonucleotides demonstrates the stable physical association of the RNA with the DNA. Importantly, complex formation only occurs upon transcription in the physiologic orientation. Reaban and Griffin [1990 Nature, 348, 342-344] found an RNA:DNA hybrid structure that was limited to an atypical 143 nucleotide purine region within a 2.3 kb S alpha segment. Here we demonstrate RNA:DNA hybrid formation in more typical switch sequences (lacking the atypical 143 nucleotide purine tract) from a variety of switch regions that are only 60-70% purine on the non-template strand. These results suggest a general model involving an RNA:DNA complex as an intermediate during class switch recombination.
机译：对类开关重组的调控和机制的中心是对转录与DNA重组之间关系的理解。我们以前使用微型染色体底物证明，在开关区域之间发生重组需要生理学定向的转录。在此报告中，我们证明了在体外转录条件下，这些相同的DNA片段和其他DNA片段形成RNA：DNA复合体。我们发现重复的鼠开关区域（Smu，Sγ2b和Sγ3）的无细胞转录导致改变琼脂糖凝胶上的DNA迁移率。这些改变的迁移率对RNA酶A具有抗性，但对RNA酶H敏感。在标记的核糖核苷酸存在下的转录证明RNA与DNA的稳定的物理缔合。重要的是，复合物的形成仅在以生理学方向转录时发生。 Reaban and Griffin [1990 Nature，348，342-344]发现了一种RNA：DNA杂合结构，该结构仅限于2.3 kb S alpha片段内的非典型143核苷酸嘌呤区域。在这里，我们从非模板链上只有60-70％嘌呤的各种开关区域中，以更典型的开关序列（缺乏非典型的143个核苷酸的嘌呤束）证明了RNA：DNA杂合体的形成。这些结果表明，涉及在类开关重组过程中涉及RNA：DNA复合体作为中间体的通用模型。

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