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【2h】

SNRP-27 the C. elegans homolog of the tri-snRNP 27K protein has a role in 5′ splice site positioning in the spliceosome

机译：SNRP-27是tri-snRNP 27K蛋白的秀丽隐杆线虫同源物在剪接体中的5剪接位点定位中起作用

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The tri-snRNP 27K protein is a component of the human U4/U6-U5 tri-snRNP and contains an N-terminal phosphorylated RS domain. In a forward genetic screen in C. elegans, we previously identified a dominant mutation, M141T, in the highly-conserved C-terminal region of this protein. The mutant allele promotes changes in cryptic 5′ splice site choice. To better understand the function of this poorly characterized splicing factor, we performed high-throughput mRNA sequencing analysis on worms containing this dominant mutation. Comparison of alternative splice site usage between the mutant and wild-type strains led to the identification of 26 native genes whose splicing changes in the presence of the snrp-27 mutation. The changes in splicing are specific to alternative 5′ splice sites. Analysis of new alleles suggests that snrp-27 is an essential gene for worm viability. We performed a novel directed-mutation experiment in which we used the CRISPR-cas9 system to randomly generate mutations specifically at M141 of SNRP-27. We identified eight amino acid substitutions at this position that are viable, and three that are homozygous lethal. All viable substitutions at M141 led to varying degrees of changes in alternative 5′ splicing of native targets. We hypothesize a role for this SR-related factor in maintaining the position of the 5′ splice site as U1snRNA trades interactions at the 5′ end of the intron with U6snRNA and PRP8 as the catalytic site is assembled.
机译：tri-snRNP 27K蛋白是人U4 / U6-U5 tri-snRNP的组成部分，包含N端磷酸化的RS结构域。在秀丽隐杆线虫的前向遗传筛选中，我们先前在该蛋白的高度保守的C端区域中发现了一个显性突变M141T。突变等位基因促进了隐蔽5'剪接位点选择的改变。为了更好地了解这种表征较差的剪接因子的功能，我们对包含该显性突变的蠕虫进行了高通量mRNA测序分析。突变和野生型菌株之间的替代剪接位点使用的比较导致了26个天然基因的鉴定，这些基因的剪接在snrp-27突变的存在下发生了变化。剪接的变化特定于替代的5'剪接位点。对新等位基因的分析表明，snrp-27是蠕虫生存力的重要基因。我们进行了一个新颖的定向突变实验，其中我们使用了CRISPR-cas9系统随机产生了特定于SNRP-27的M141的突变。我们在此位置鉴定了八个可行的氨基酸取代，以及三个纯合致死性氨基酸。 M141处的所有可行取代导致天然靶标的替代5'拼接程度不同。我们假设此SR相关因子在维持5'剪接位点的位置中起着作用，因为当组装催化位点时，U1snRNA在内含子5'末端与U6snRNA和PRP8进行了相互作用。

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