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A Rapid Scalable Method for the Isolation Functional Study and Analysis of Cell-derived Extracellular Matrix

机译：一种快速可扩展的方法用于细胞衍生的细胞外基质的分离功能研究和分析

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摘要

The extracellular matrix (ECM) is recognized as a diverse, dynamic, and complex environment that is involved in multiple cell-physiological and pathological processes. However, the isolation of ECM, from tissues or cell culture, is complicated by the insoluble and cross-linked nature of the assembled ECM and by the potential contamination of ECM extracts with cell surface and intracellular proteins. Here, we describe a method for use with cultured cells that is rapid and reliably removes cells to isolate a cell-derived ECM for downstream experimentation.Through use of this method, the isolated ECM and its components can be visualized by in situ immunofluorescence microscopy. The dynamics of specific ECM proteins can be tracked by tracing the deposition of a tagged protein using fluorescence microscopy, both before and after the removal of cells. Alternatively, the isolated ECM can be extracted for biochemical analysis, such as sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and immunoblotting. At larger scales, a full proteomics analysis of the isolated ECM by mass spectrometry can be conducted. By conducting ECM isolation under sterile conditions, sterile ECM layers can be obtained for functional or phenotypic studies with any cell of interest. The method can be applied to any adherent cell type, is relatively easy to perform, and can be linked to a wide repertoire of experimental designs.
机译：细胞外基质（ECM）被认为是一个涉及多种细胞生理和病理过程的多样化，动态和复杂的环境。然而，由于组装的ECM的不溶和交联性质以及ECM提取物可能被细胞表面和细胞内蛋白污染，从组织或细胞培养物中分离ECM变得很复杂。在这里，我们描述了一种用于培养细胞的方法，该方法可以快速，可靠地去除细胞以分离出细胞来源的ECM进行下游实验。通过使用该方法，可以通过原位免疫荧光显微镜观察分离的ECM及其成分。可以通过在去除细胞之前和之后使用荧光显微镜追踪标记的蛋白的沉积来跟踪特定ECM蛋白的动力学。或者，可以提取分离的ECM进行生化分析，例如十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和免疫印迹。在较大规模下，可以通过质谱对分离的ECM进行完整的蛋白质组学分析。通过在无菌条件下进行ECM分离，可以获得无菌ECM层，用于任何目的细胞的功能或表型研究。该方法可以应用于任何类型的贴壁细胞，相对容易执行，并且可以与各种实验设计联系起来。

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