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首页> 美国卫生研究院文献>Journal of Visualized Experiments : JoVE >Hydrodynamic Renal Pelvis Injection for Non-viral Expression of Proteins in the Kidney
【2h】

Hydrodynamic Renal Pelvis Injection for Non-viral Expression of Proteins in the Kidney

机译：液压动力骨盆注射液对肾脏蛋白的非病毒表达

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摘要

Hydrodynamic injection creates a local, high-pressure environment to transfect various tissues with plasmid DNA and other substances. Hydrodynamic tail vein injection, for example, is a well-established method by which the liver can be transfected. This manuscript describes an application of hydrodynamic principles by injection of the mouse kidney directly with plasmid DNA for kidney-specific gene expression. Mice are anesthetized and the kidney is exposed by a flank incision followed by a fast injection of a plasmid DNA-containing solution directly into the renal pelvis. The needle is kept in place for ten seconds and the incision site is sutured. The following day, live animal imaging, Western blot, or immunohistochemistry may be used to assay gene expression, or other assays suited to the transgene of choice are used for detection of the protein of interest. Published methods to prolong gene expression include transposon-mediated transgene integration and cyclophosphamide treatment to inhibit the immune response to the transgene.
机译：流体动力注射产生局部高压环境，以质粒DNA和其他物质转染各种组织。例如，水动力尾静脉注射是一种成熟的方法，可通过该方法转染肝脏。该手稿描述了通过向小鼠肾脏直接注射质粒DNA进行肾脏特异性基因表达的流体力学原理的应用。麻醉小鼠，并通过侧面切口将肾脏暴露，然后将含质粒DNA的溶液直接快速注入肾盂。将针头留在原处十秒钟，然后缝合切口部位。第二天，可以使用活体动物成像，蛋白质印迹或免疫组织化学来分析基因表达，或将其他适合所选转基因的分析用于检测目标蛋白质。延长基因表达的已公开方法包括转座子介导的转基因整合和环磷酰胺处理以抑制对转基因的免疫反应。

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