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Application of a Bacterial Artificial Chromosome Modification System for aHuman Artificial Chromosome Vector

机译：细菌人工染色体修饰系统在植物中的应用人类人工染色体载体

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Exactly controlled conditional gene expressing systems are crucial for genomic functional research, animal transgenesis and gene therapy. Bacterial artificial chromosomes (BACs) are optimal for harboring long fragments of genomic DNA or large cDNA up to 300 kb in size. Therefore, BACs are available to produce transgenic cells and animals for the functional studies of genes. However, BAC can insert DNA randomly into the host genome, possibly causing unpredicted expression. We previously developed a human artificial chromosome (HAC) vector from human chromosome 21 using chromosome engineering. The HAC vector has several important characteristics desired for an ideal gene delivery vector, including stable episomal maintenance, and the ability to carry large genomic DNA containing its own regulatory element, thus allowing physiological regulation of the transgene in a manner similar to that of the native chromosome. In this study, we develop a system fusing BAC library and HAC technology together to allow tight control of gene expression. This system enables BAC to be cloned into the defined locus on the HAC vector by the Cre/loxP system. In addition, the genome in the BAC is possible to be engineered freely by the BAC recombineering technology. This system is a highly efficient tool for the rapid generation of stringently controlled gene expression system on the HAC vector.
机译：精确控制的条件基因表达系统对于基因组功能研究，动物转基因和基因治疗至关重要。细菌人工染色体（BAC）最适合用于容纳长至300 kb的基因组DNA或大cDNA的长片段。因此，BAC可用于生产用于基因功能研究的转基因细胞和动物。但是，BAC可以将DNA随机插入宿主基因组，可能导致无法预测的表达。我们先前使用染色体工程技术从人类21号染色体上开发了人类人工染色体（HAC）载体。 HAC载体具有理想基因传递载体所需的几个重要特征，包括稳定的游离状态维持以及携带包含其自身调控元件的大基因组DNA的能力，从而允许以类似于天然的方式对转基因进行生理调控染色体。在这项研究中，我们开发了一个将BAC库和HAC技术融合在一起的系统，从而可以严格控制基因表达。该系统使Cre / loxP系统可以将BAC克隆到HAC载体上的指定基因座中。另外，可以通过BAC重组技术对BAC中的基因组进行自由改造。该系统是在HAC载体上快速生成严格控制的基因表达系统的高效工具。

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