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首页> 美国卫生研究院文献>The American Journal of Tropical Medicine and Hygiene >Development of a Multiplexed Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) Assay to Identify Common Members of the Subgenera Culex (Culex) and Culex (Phenacomyia) in Guatemala
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Development of a Multiplexed Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) Assay to Identify Common Members of the Subgenera Culex (Culex) and Culex (Phenacomyia) in Guatemala

机译：多重聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）分析技术的发展以鉴定危地马拉的库克斯（Culex）和库克斯（Phenacomyia）亚属的普通成员

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Morphological differentiation of mosquitoes in the subgenera Culex (Culex) and Culex (Phenacomyia) in Guatemala is difficult, with reliable identification ensured only through examination of larval skins from individually reared specimens and associated male genitalia. We developed a multiplexed polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) assay to identify common Cx. (Cux.) and Cx. (Phc.). Culex (Cux.) chidesteri, Cx. (Cux.) coronator, Cx. (Cux.) interrogator, Cx. (Cux.) quinquefasciatus, Cx. (Cux.) nigripalpus/Cx. (Cux.) thriambus, and Cx. (Phc.) lactator were identified directly with a multiplexed primer cocktail comprising a conserved forward primer and specific reverse primers targeting ribosomal DNA (rDNA). Culex nigripalpus and Cx. thriambus were differentiated by restriction digest of homologous amplicons. The assay was developed and optimized using well-characterized specimens from Guatemala and the United States and field tested with unknown material from Guatemala. This assay will be a valuable tool for mosquito identification in entomological and arbovirus ecology studies in Guatemala.
机译：在危地马拉的库莱克斯（Culex）和库莱克斯（Phenacomyia）亚属中，蚊子的形态分化非常困难，只有通过检查单独饲养的标本和相关的男性生殖器的幼虫皮肤才能确保可靠的鉴定。我们开发了一种多重聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）分析法，以鉴定常见的Cx。 （辅助）和Cx。 （Phc。）。库克斯（Cux。）chidesteri，Cx。 （辅助）加冕者Cx。 （Cux。）询问器 Cx。（ Cux。） quinquefasciatus ， Cx。（ Cux。 ）黑猩猩 / Cx。（ Cux。）暴风雨和 Cx。< / em>（ Phc。）乳化剂直接用包含保守正向引物和靶向核糖体DNA（rDNA）的特异性反向引物的多重引物混合物鉴定。 Culex nigripalpus 和 Cx。同源扩增子的限制性酶切可以区分出硫磺。该方法是使用来自危地马拉和美国的特征充分的标本开发和优化的，并使用来自危地马拉的未知材料进行了现场测试。该检测方法将成为危地马拉在昆虫学和虫媒病毒生态学研究中鉴定蚊子的宝贵工具。

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