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【2h】

How Much H2O2 Is Produced by Recombinant D-Amino Acid Oxidase in Mammalian Cells?

机译：哺乳动物细胞中重组D-氨基酸氧化酶产生多少过氧化氢？

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摘要

Yeast D-amino acid oxidase (DAO) can serve as a genetically encoded producer of reactive oxygen species (ROS) in redox signaling studies. However, dynamics of hydrogen peroxide production and its sensitivity to externally added D-alanine (D-Ala) in cells have not been determined. Here we show that DAO, fused to a genetically encoded H2O2 indicator HyPer, can be used for controlled production of ROS in living eukaryotic cells. We found a clear heterogeneity in ROS production dynamics between individual cells. Moreover, different cell lines demonstrated distinct sensitivity to added D-Ala. Finally, by comparing signals generated by the HyPer-DAO fusion protein versus coexpressed HyPer and DAO proteins, we show that the fusion system is more sensitive to hydrogen peroxide production. Our results show the utility of the HyPer-DAO genetically encoded system for redox signaling studies and suggest that H2O2 produced by DAO in the cytoplasm acts locally in close proximity to the enzyme. Antioxid. Redox Signal. 20, 1039–1044.
机译：酵母D-氨基酸氧化酶（DAO）可以作为氧化还原信号研究中活性氧（ROS）的基因编码生产者。但是，尚未确定过氧化氢产生的动力学及其对细胞中外部添加的D-丙氨酸（D-Ala）的敏感性。在这里，我们显示与遗传编码的H2O2指示剂HyPer融合的DAO可用于在真核生物细胞中控制ROS的产生。我们在单个细胞之间的ROS生产动态中发现了明显的异质性。而且，不同的细胞系表现出对添加的D-Ala的独特敏感性。最后，通过比较HyPer-DAO融合蛋白与共表达的HyPer和DAO蛋白产生的信号，我们显示出融合系统对过氧化氢的产生更为敏感。我们的结果表明，HyPer-DAO遗传编码系统可用于氧化还原信号研究，并表明DAO在细胞质中产生的H2O2在局部处与酶密切相关。抗氧化。氧化还原信号。 20，1039–1044。

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