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首页> 美国卫生研究院文献>Journal of Applied Crystallography >Facilitating protein crystal cryoprotection in thick-walled plastic capillaries by high-pressure cryocooling
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Facilitating protein crystal cryoprotection in thick-walled plastic capillaries by high-pressure cryocooling

机译：通过高压冷冻冷却促进厚壁塑料毛细管中的蛋白质晶体冷冻保护

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摘要

Many steps in the X-ray crystallographic solution of protein structures have been automated. However, the harvesting and cryocooling of crystals still rely primarily on manual handling, frequently with consequent mechanical damage. An attractive alternative is to grow crystals directly inside robust plastic capillaries that may be cryocooled and mounted on the beamline goniometer. In this case, it is still desirable to devise a way to cryoprotect the crystals, which is difficult owing to the poor thermal conductivity of thick plastic capillary walls and the large thermal mass of the capillary and internal mother liquor. A method is described to circumvent these difficulties. It is shown that high-pressure cryocooling substantially reduced the minimal concentrations of cryoprotectants required to cryocool water inside capillaries without formation of ice crystals. The minimal concentrations of PEG 200, PEG 400 and glycerol necessary for complete vitrification under pressure cryocooling were determined.
机译：蛋白质结构的X射线晶体学解决方案中的许多步骤已实现自动化。但是，晶体的收获和低温冷却仍然主要依靠人工处理，常常会造成机械损坏。一种有吸引力的替代方法是直接在坚固的塑料毛细管中生长晶体，这些晶体可以进行冷冻冷却并安装在光束线测角仪上。在这种情况下，仍然需要设计一种冷冻保护晶体的方法，由于厚的塑料毛细管壁的导热性差，并且毛细管和内部母液的热质量大，因此很难做到这一点。描述了一种避免这些困难的方法。结果表明，高压冷冻冷却显着降低了在不形成冰晶的情况下将毛细管内的水冷冻冷却所需的最小防冻剂浓度。确定了在压力冷冻冷却下完全玻璃化所必需的PEG 200，PEG 400和甘油的最低浓度。

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