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首页> 美国卫生研究院文献>Molecular Endocrinology >Real-Time Visualization of Human Prolactin Alternate Promoter Usage in Vivo Using a Double-Transgenic Rat Model
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Real-Time Visualization of Human Prolactin Alternate Promoter Usage in Vivo Using a Double-Transgenic Rat Model

机译：使用双转基因大鼠模型实时观察人类催乳素替代启动子的体内用法

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We have generated a humanized double-reporter transgenic rat for whole-body in vivo imaging of endocrine gene expression, using the human prolactin (PRL) gene locus as a physiologically important endocrine model system. The approach combines the advantages of bacterial artificial chromosome recombineering to report appropriate regulation of gene expression by distant elements, with double reporter activity for the study of highly dynamic promoter regulation in vivo and ex vivo. We show first that this rat transgenic model allows quantitative in vivo imaging of gene expression in the pituitary gland, allowing the study of pulsatile dynamic activity of the PRL promoter in normal endocrine cells in different physiological states. Using the dual reporters in combination, dramatic and unexpected changes in PRL expression were observed after inflammatory challenge. Expression of PRL was shown by RT-PCR to be driven by activation of the alternative upstream extrapituitary promoter and flow cytometry analysis pointed at diverse immune cells expressing the reporter gene. These studies demonstrate the effective use of this type of model for molecular physiology and illustrate the potential for providing novel insight into human gene expression using a heterologous system.
机译：我们已经使用人催乳素（PRL）基因位点作为生理学重要的内分泌模型系统，为人体内分泌基因表达的体内成像生成了人源化的双报告转基因大鼠。该方法结合了细菌人工染色体重组的优势，可通过远距离元件报告基因表达的适当调控，并具有双重报道分子活性，可用于体内和离体的高动态启动子调控研究。我们首先表明，该大鼠转基因模型允许垂体腺中基因表达的定量体内成像，从而可以研究正常生理状态下内分泌细胞中PRL启动子的脉动动态活性。结合使用双重报告基因，在炎症激发后观察到PRL表达发生了惊人的变化。 RT-PCR显示PRL的表达是由替代性上游垂体外启动子的激活驱动的，流式细胞术分析指向表达该报道基因的多种免疫细胞。这些研究证明了这种类型的分子生理学模型的有效利用，并说明了使用异源系统对人类基因表达提供新颖见解的潜力。

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