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Akap350 Recruits Eb1 to The Spindle Poles Ensuring Proper Spindle Orientation and Lumen Formation in 3d Epithelial Cell Cultures

机译：Akap350将Eb1招募到主轴确保3d上皮细胞培养中的主轴正确定向和管腔形成

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摘要

The organization of epithelial cells to form hollow organs with a single lumen requires the accurate three-dimensional arrangement of cell divisions. Mitotic spindle orientation is defined by signaling pathways that provide molecular links between specific spots at the cell cortex and astral microtubules, which have not been fully elucidated. AKAP350 is a centrosomal/Golgi scaffold protein, implicated in the regulation of microtubule dynamics. Using 3D epithelial cell cultures, we found that cells with decreased AKAP350 expression (AKAP350KD) formed polarized cysts with abnormal lumen morphology. Analysis of mitotic cells in AKAP350KD cysts indicated defective spindle alignment. We established that AKAP350 interacts with EB1, a microtubule associated protein that regulates spindle orientation, at the spindle poles. Decrease of AKAP350 expression lead to a significant reduction of EB1 levels at spindle poles and astral microtubules. Conversely, overexpression of EB1 rescued the defective spindle orientation induced by deficient AKAP350 expression. The specific delocalization of the AKAP350/EB1complex from the centrosome decreased EB1 levels at astral microtubules and lead to the formation of 3D-organotypic structures which resembled AKAP350KD cysts. We conclude that AKAP350 recruits EB1 to the spindle poles, ensuring EB1 presence at astral microtubules and proper spindle orientation during epithelial morphogenesis.
机译：上皮细胞的组织以单个管腔形成中空器官需要细胞分裂的精确三维排列。有丝分裂纺锤体的方向是由信号通路定义的，该信号通路在细胞皮层的特定斑点和星状微管之间提供了分子联系，而这些尚未完全阐明。 AKAP350是一种中心体/高尔基体支架蛋白，与微管动力学的调节有关。使用3D上皮细胞培养，我们发现AKAP350表达降低的细胞（AKAP350KD）形成了具有异常管腔形态的极化囊肿。分析AKAP350KD囊肿中的有丝分裂细胞表明纺锤体排列不良。我们确定AKAP350与EB1相互作用，EB1是一种微管相关蛋白，可调节纺锤体的纺锤体方向。 AKAP350表达的减少导致纺锤极和星状微管的EB1水平显着降低。相反，EB1的过表达挽救了AKAP350表达不足引起的纺锤定向缺陷。 AKAP350 / EB1复合体从中心体的特定脱域降低了星状微管处的EB1水平，并导致形成类似于AKAP350KD囊肿的3D-有机型结构。我们得出的结论是，AKAP350将EB1募集到纺锤极，确保EB1在星状微管中存在并且在上皮形态发生过程中正确纺锤定向。

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