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首页> 美国卫生研究院文献>FEBS Open Bio >Comprehensive optimization of a reporter assay toolbox for three distinct CRISPR‐Cas systems
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Comprehensive optimization of a reporter assay toolbox for three distinct CRISPR‐Cas systems

机译：用于三个不同CRSPR-CAS系统的报告分析工具箱的全面优化

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摘要

The clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats‐associated DNA nuclease (CRISPR‐Cas) protein system allows programmable gene editing through inducing double‐strand breaks. Reporter assays for DNA cleavage and DNA repair events play an important role in advancing the CRISPR technology and improving our understanding of the underlying molecular mechanisms. Here, we developed a series of reporter assays to probe mechanisms of action of various editing processes, including nonhomologous DNA end joining, homology‐directed repair and single‐strand annealing. With special target design, the reporter assays as an optimized toolbox can be used to take advantage of three distinct CRISPR‐Cas systems (Streptococcus pyogenes Cas9, Staphylococcus aureus Cas9 and Francisella novicida U112 Cpf1) and two different reporters (GFP and Gaussia luciferase). We further validated the Gaussia reporter assays using a series of small molecules, including NU7441, RI‐1 and Mirin, and showcased the use of a GFP reporter assay as an effective tool for enrichment of cells with edited genome.
机译：聚集的，定期间隙，短的回文重复相关的DNA核酸酶（CRISPR-CAS）蛋白质系统允许通过诱导双链断裂来编辑可编程基因。 DNA裂解和DNA修复事件的记者测定在推进CRISPR技术方面发挥着重要作用，并改善我们对潜在的分子机制的理解。在这里，我们开发了一系列报告基因分析来探测各种编辑处理，包括非同源DNA末端连接，同源定向修复和单链退火的作用机制。通过特殊的目标设计，作为优化工具箱的记者测定可用于利用三种不同的CRISPR-CAS系统（链球菌Pyogenes Cas9，金黄色葡萄球菌Cas9和Francisella Novicida U112 CPF1）和两种不同的报告（GFP和高斯荧光素酶）。我们使用一系列小分子，包括NU7441，RI-1和料酒的进一步验证了的Gaussia报告基因分析，并展示了使用GFP报道基因测定的作为与编辑的基因组的细胞的富集的有效工具。

著录项

  • 期刊名称 FEBS Open Bio
  • 作者

    Li Chen; Haoyuan Gao; Bing Zhou; Yu Wang;

  • 作者单位
  • 年(卷),期 2021(11),7
  • 年度 2021
  • 页码 1965–1980
  • 总页数 16
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种
  • 中图分类 生物学;
  • 关键词

    机译：CRISPR;DNA修复;基因编辑;记者测定;小分子;

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