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【2h】

Nucleofection of DCs to Generate Multivirus-specific T Cells for Prevention or Treatment of Viral Infections in the Immunocompromised Host

机译：DC的核转染以产生多病毒特异性T细胞以预防或治疗免疫功能低下的宿主中的病毒感染

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Viral infections cause morbidity and mortality in allogeneic hematopoietic stem cell transplant (HSCT) recipients. To prevent and treat these, we have produced and infused cytotoxic T lymphocytes (CTLs) with specificity for Epstein–Barr virus (EBV), cytomegalovirus (CMV), and adenovirus (Adv), and shown that small numbers of infused cells proliferate in vivo and protect against all three viruses. Despite these encouraging results, broader implementation of this approach is limited by the need for infectious virus material (EBV), expensive production of clinical grade adenoviral vectors, and a prolonged (8–12 weeks) period of manufacture. There is also competition between virus-derived antigens within antigen-presenting cells (APCs), limiting extension to additional agents. We now describe an approach that uses DNA nucleofection of dendritic cells (DCs) with DNA plasmids that encode a range of immunodominant and subdominant viral antigens from CMV, EBV, BK, and Adv. Within 10 days, this methodology provides multivirus-reactive CTLs that lack alloreactivity. We further demonstrate that nucleofected DC stimulation can be combined with interferon-γ (IFN-γ) capture technology to produce even more rapid multivirus-CTL products for treatment of acute infection. These CTL generation procedures should increase the feasibility and applicability of T-cell therapy.
机译：病毒感染导致同种异体造血干细胞移植（HSCT）受者的发病率和死亡率。为了预防和治疗这些疾病，我们生产并注入了对爱泼斯坦-巴尔病毒（EBV），巨细胞病毒（CMV）和腺病毒（Adv）具有特异性的细胞毒性T淋巴细胞（CTL），并显示了少量注入的细胞在体内增殖并防御所有三种病毒。尽管取得了这些令人鼓舞的结果，但这种方法的广泛实施受到传染性病毒材料（EBV）的需求，临床级腺病毒载体生产昂贵以及制造时间延长（8至12周）的限制。抗原呈递细胞（APC）中病毒衍生的抗原之间也存在竞争，从而限制了对其他试剂的扩展。现在我们描述一种使用树突状细胞（DCs）与DNA质粒的DNA核转染的方法，该DNA质粒编码一系列来自CMV，EBV，BK和Adv的免疫优势和优势病毒抗原。在10天内，此方法提供了缺乏同种反应性的可与多病毒反应的CTL。我们进一步证明，核感染的DC刺激可以与干扰素-γ（IFN-γ）捕获技术结合使用，以产生甚至更快的多病毒CTL产品来治疗急性感染。这些CTL生成程序应增加T细胞疗法的可行性和适用性。

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