...
  • 主题
高级搜索  >
历史搜索 清空历史
首页> 外文期刊>分析化学 >リトコール酸固定化担体を用いるアフィニティークロマトグラフィーによるラット肝細胞内タンパク質の捕捉と液体クロマトグラフィー質量分析法による同定
【24h】

リトコール酸固定化担体を用いるアフィニティークロマトグラフィーによるラット肝細胞内タンパク質の捕捉と液体クロマトグラフィー質量分析法による同定

机译：固结石蜡酸载体的亲和色谱法捕获大鼠肝细胞中的蛋白质，并通过液相色谱-质谱法鉴定

获取原文
获取原文并翻译 | 示例
           
页面导航
  • 摘要
  • 著录项
  • 相似文献
  • 相关主题

摘要

モノヒドロキシ胆汁酸であるリトコール酸（LCA）の24位カルポキシル基と3位ヒドロキシ基を介して支持体にｹﾌ固定化した2種類のアフィニティー担体を調製し，これらを用いてラット肝細胞内ミトコンドリァ画分のLCAに結合親和性を持つタンパク質を捕捉するとともに，電気泳動法によるディファレンシャルディスプレーで特定したタンパク質を液体クロマトグラフィー／エレクトロスプレーイオン化質量分析に付して分子量とヒット率を加味しながらデータベース検索にてタンパク質を同定した．その結果，carbamoylphosphatesynthase I，glutamate dehydrogenase，acyl-CoA dehydrogenase，enoyl-CoA hydratase，acetyl-CoA acyltransferase，aldehyde dehydrogenase など，ミトコンドリアに局在する酵素タンパク質のほか，ミトコンドリア画分に混入した血中のalbumin，細胞質画分のglutathione S-transferase などのタンパク質であることを明らかにした．%Affinity chromatography is a powerful method for protein separation. It is based on a specific interaction between an immobilized ligand and the target proteins to be separated. Since lithocholic acid (LCA), one of secondary bile acids, has been shown to exert its function as the ligand toward nuclear receptors and a membrane-type G protein-coupled receptor, the abilities of molecular recognition and acquisition of LCA may be applicable for ligands to capture unknown functional proteins by affinity chromatography. In this study, LCA was covalently bound to an activated agarose through a bridge introduced at the C-3 and C-24 positions. The affinity absorbents were applied to capture proteins in a rat mitochondrial fraction. Structure analysis of the captured proteins after SDS-PAGE separation was carried out by liquid chromatogra-phy/electrospray ionization-tandem mass spectrometry combination with computer-assisted programs, where carbamoyl phosphate synthase I, glutamate dehydrogenase, acyl-CoA dehydroge-nase, enoyl-CoA hydratase, acetyl-CoA acyltransferase and aldehyde dehydrogenase were identified. Serum albumin and cytosolic glutathione 5-transferase, which were contaminated in mitochondrial fraction, were also identified.
机译：通过将两种类型的亲和性载体经由24位的枯草酚基和3-位的羟基固定在支持物上的整体胆汁酸，石胆酸（LCA）上来制备两种类型的亲和性载体。捕获对级分的LCA具有结合亲和力的蛋白质，并通过电泳/差示电泳鉴定通过电泳/液相色谱/电喷雾电离质谱分析鉴定的蛋白质，同时考虑分子量和命中率。鉴定出该蛋白质。结果，除了位于线粒体中的酶蛋白，例如氨基甲酰基磷酸合酶I，谷氨酸脱氢酶，酰基辅酶A脱氢酶，烯酰辅酶A水合酶，乙酰辅酶A酰基转移酶和醛脱氢酶，血白蛋白和被线粒体污染的细胞质揭示出该级分是蛋白质，例如谷胱甘肽S-转移酶。 ％亲和色谱法是一种强大的蛋白质分离方法，它基于固定的配体与待分离的目标蛋白质之间的特异性相互作用，因为仲胆汁酸之一的硫代胆酸（LCA）已显示出其功能。作为针对核受体和膜型G蛋白偶联受体的配体，LCA的分子识别和获取能力可能适用于配体通过亲和色谱法捕获未知功能蛋白的功能。通过在C-3和C-24位置引入一个桥来活化琼脂糖。亲和吸收剂用于捕获大鼠线粒体级分中的蛋白质。通过液相色谱对SDS-PAGE分离后捕获的蛋白质进行结构分析/电喷雾电离串联质谱与计算机辅助程序的组合，其中氨基甲酰磷酸合酶I，谷氨酸脱氢酶e，鉴定了酰基辅酶A脱氢酶，烯酰基辅酶A水合酶，乙酰辅酶A酰基转移酶和醛脱氢酶。

著录项

相似文献

  • 外文文献
  • 中文文献
  • 专利
获取原文

客服邮箱：kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备：11010802029741号 ICP备案号：京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有

  • 客服微信

  • 服务号