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首页> 外文期刊>Bioprocess and Biosystems Engineering >Production and purification of recombinant human granulocyte-macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) from high cell density cultures of Pichia pastoris
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Production and purification of recombinant human granulocyte-macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) from high cell density cultures of Pichia pastoris

机译：从巴斯德毕赤酵母的高细胞密度培养物中生产和纯化重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）

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Granulocyte-macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) is a hematopoietic growth factor, which has been used as a therapeutic agent in clinical cases like neutropenia. In this study, we report the production of recombinant human GM-CSF in the methylotrophic yeast Pichia pastoris through secretory expression using the inducible AOX1 promoter. Recombinant P. pastoris GS115 cells were grown in fed batch cultures to obtain a biomass density of 55.6 gDCW L~(-1) and a high volumetric activity of 131 mg L~(-1) of GM-CSF. The protein migrated as a diffuse band on SDS-PAGE at the range of 28-35 kDa indicating differential glycosylation. The secreted protein was purified to 95% in two steps using cation exchange and size exclusion chromatography.
机译：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）是造血生长因子，已在中性粒细胞减少症等临床病例中用作治疗剂。在这项研究中，我们报告通过使用诱导型AOX1启动子的分泌表达，在甲基营养型酵母巴斯德毕赤酵母中生产重组人GM-CSF。重组巴斯德毕赤酵母GS115细胞在补料分批培养中生长，获得55.6 gDCW L〜（-1）的生物量密度和131 mg L〜（-1）的GM-CSF高体积活性。该蛋白在28-35 kDa的范围内以SDS-PAGE上的扩散带迁移，表明存在糖基化差异。使用阳离子交换和尺寸排阻色谱法，可通过两个步骤将分泌的蛋白质纯化至95％。

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