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Visualization of bHLH transcription factor interactions in living mammalian cell nuclei and developing chicken neural tube by FRET.

机译：通过FRET观察活的哺乳动物细胞核和发育中的鸡神经管中bHLH转录因子相互作用的情况。

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Members of the basic helix-loop-helix (bHLH) gene family play important roles in vertebrate neurogenesis. In this study, confocal microscopy-based fluorescence resonance energy transfer (FRET) is used to monitor bHLH protein-protein interactions under various physiological conditions. Tissue-specific bHLH activators, NeuroD1, Mash1, Neurogenin1 (Ngn1), Neurogenin2 (Ngn2), and ubiquitous expressed E47 protein are tagged with enhanced yellow fluorescence protein (EYFP) and enhanced cyan fluorescence protein (ECFP), respectively. The subcellular localization and mobility of bHLH fusion proteins are examined in HEK293 cells. By transient transfection and in ovo electroporation, four pairs of tissue-specific bHLH activators and E47 protein are over-expressed in HEK293 cells and developing chick embryo neural tube. With the acceptor photobleaching method, FRET could be detected between these bHLH protein pairs in the nuclei of transfected cells and developing neural tubes. Mash1/E47 and Ngn2/E47 FRET pairs show higher FRET efficiencies in the medial and the lateral half of chick embryo neural tube, respectively. It suggests that these bHLH protein pairs formed functional DNA-protein complexes with regulatory elements of their downstream target genes in the specific regions. This work will help one understand the behaviours of bHLH factors in vivo.Cell Research (2006) 16: 585-598. doi:10.1038/sj.cr.7310076; published online 15 June 2006.
机译：基本螺旋-环-螺旋（bHLH）基因家族的成员在脊椎动物神经发生中发挥重要作用。在这项研究中，基于共聚焦显微镜的荧光共振能量转移（FRET）用于监测bHLH蛋白质-蛋白质在各种生理条件下的相互作用。组织特异性bHLH激活剂NeuroD1，Mash1，Neurogenin1（Ngn1），Neurogenin2（Ngn2）和泛在表达的E47蛋白分别用增强的黄色荧光蛋白（EYFP）和增强的蓝绿色荧光蛋白（ECFP）标记。在HEK293细胞中检查了bHLH融合蛋白的亚细胞定位和迁移。通过瞬时转染和卵内电穿孔，HEK293细胞和正在发育的鸡胚神经管中过度表达了四对组织特异性bHLH激活剂和E47蛋白。使用受体光漂白法，可以在转染细胞核和发育中的神经管的这些bHLH蛋白对之间检测到FRET。 Mash1 / E47和Ngn2 / E47 FRET对分别在雏鸡胚胎神经管的内侧和外侧一半显示较高的FRET效率。这表明这些bHLH蛋白对与特定区域中下游靶基因的调控元件形成了功能性DNA-蛋白复合物。这项工作将有助于人们了解体内bHLH因子的行为。CellResearch（2006）16：585-598。 doi：10.1038 / sj.cr.7310076; 2006年6月15日在线发布。

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