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Development and Optimization of a Non-Radioactive JNK3 Assay

机译：非放射性JNK3检测方法的开发和优化

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In light of emerging interest in the relevance of c-Jun NH2-terminal protein kinase 3 (JNK3) as a promising drug target, we describe here an advanced non-radioactive immunosorbent JNK3 activity assay that is applicable for routine screening of small molecule ATP-competitive enzyme inhibitors. We modified and established a JNK3/ATF-2 protocol based on our previously described p38 MAPK method [1] for a substratebound non-radioactive procedure that represents a convenient alternative to conventional radioactive protein kinase assays. The objective of the present study was to validate these conditions by using the reference compounds SP600125 and SB203580 to achieve comparable IC50 results to published data. Furthermore, an IC50 for staurosporine was determined. The protocol we describe here represents an accessible and robust screening assay for JNK3 inhibitors.
机译：鉴于人们对c-Jun NH2末端蛋白激酶3（JNK3）作为有希望的药物靶标的相关性产生了新的兴趣，在此我们描述一种先进的非放射性免疫吸附剂JNK3活性测定法，该方法可用于小分子ATP竞争性酶抑制剂。我们基于先前描述的p38 MAPK方法[1]修改并建立了JNK3 / ATF-2协议，用于底物结合的非放射性程序，该程序代表了常规放射性蛋白激酶测定的便利替代方法。本研究的目的是通过使用参比化合物SP600125和SB203580验证这些条件，以达到可与公开数据相媲美的IC50结果。此外，确定了星形孢菌素的IC 50。我们在此描述的方案代表了针对JNK3抑制剂的一种可访问且强大的筛选测定方法。

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