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【24h】

Production of knockout mice by DNA microinjection of various CRISPR/Cas9 vectors into freeze-thawed fertilized oocytes

机译：通过将各种CRISPR / Cas9载体DNA显微注射到冻融的受精卵母细胞中产生基因敲除小鼠

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Background Clustered regulatory interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/CRISPR-associated protein 9 (Cas9)-mediated genome editing permits the rapid production of genetically engineered mice. To make the most of this innovative technology, a streamlined procedure is needed for the robust construction of CRISPR/Cas9 vectors, the efficient preparation of mouse oocytes, and refined genotyping strategies. Although we previously demonstrated the applicability of oocyte cryopreservation technologies and various genotyping methods in the production of transcription activator-like effector nuclease-mediated genome editing in mice, it has not yet been clarified whether these techniques can be applied to the CRISPR/Cas9-mediated generation of knockout mice. In this study, we investigated easy, efficient, and robust methods of creating knockout mice using several CRISPR/Cas9 systems.
机译：背景簇状调控间隔短回文重复序列（CRISPR）/ CRISPR相关蛋白9（Cas9）介导的基因组编辑允许快速生产基因工程小鼠。为了充分利用这种创新技术，需要一种简化的过程来稳定构建CRISPR / Cas9载体，有效制备小鼠卵母细胞以及完善的基因分型策略。尽管我们之前已经证明了卵母细胞冷冻保存技术和各种基因分型方法在小鼠中转录激活因子样效应子核酸酶介导的基因组编辑中的适用性，但尚不清楚这些技术是否可以应用于CRISPR / Cas9介导的剔除小鼠的一代。在这项研究中，我们研究了使用几种CRISPR / Cas9系统创建基因敲除小鼠的简便，有效和强大的方法。

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