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【24h】

Cross-linking mass spectrometry identifies new interfaces of Augmin required to localise the γ-tubulin ring complex to the mitotic spindle

机译：交联质谱鉴定了将γ-微管蛋白环复合物定位于有丝分裂纺锤体所需的Augmin新界面

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The hetero-octameric protein complex, Augmin, recruits γ-Tubulin ring complex (γ-TuRC) to pre-existing microtubules (MTs) to generate branched MTs during mitosis, facilitating robust spindle assembly. However, despite a recent partial reconstitution of the human Augmin complex?in vitro, the molecular basis of this recruitment remains unclear. Here, we used immuno-affinity purification of?in vivo?Augmin from?Drosophila?and cross-linking/mass spectrometry to identify distance restraints between residues within the eight Augmin subunits in the absence of any other structural information. The results allowed us to predict potential interfaces between Augmin and γ-TuRC. We tested these predictions biochemically and in the?Drosophila?embryo, demonstrating that specific regions of the Augmin subunits, Dgt3, Dgt5 and Dgt6 all directly bind the γ-TuRC protein, Dgp71WD, and are required for the accumulation of γ-TuRC, but not Augmin, to the mitotic spindle. This study therefore substantially increases our understanding of the molecular mechanisms underpinning MT-dependent MT nucleation.
机译：异八聚体蛋白复合物Augmin将γ-微管蛋白环复合物（γ-TuRC）募集到预先存在的微管（MTs）上，从而在有丝分裂期间生成分支MTs，从而促进了牢固的纺锤体组装。然而，尽管最近有人在体外重组了人的Augmin复合物，但这种募集的分子基础仍不清楚。在这里，我们使用了亲和力从“果蝇”中体内“ Augmin”的免疫亲和纯化和交联/质谱法来鉴定在没有任何其他结构信息的情况下，八个Augmin亚基内残基之间的距离限制。结果使我们能够预测Augmin和γ-TuRC之间的潜在界面。我们对这些预测进行了生化检验，并在“果蝇”胚胎中进行了测试，证明了Augmin亚基的特定区域Dgt3，Dgt5和Dgt6全部直接结合了γ-TuRC蛋白Dgp71WD，并且是γ-TuRC积累所必需的，但是不是Augmin，而是有丝分裂纺锤体。因此，这项研究大大增加了我们对支撑MT依赖性MT成核的分子机制的理解。

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