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首页> 外文期刊>Clinical and diagnostic laboratory immunology >Differential Detection of Five Mouse-Infecting Helicobacter Species by Multiplex PCR
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Differential Detection of Five Mouse-Infecting Helicobacter Species by Multiplex PCR

机译：多重PCR差异检测五个感染小鼠的幽门螺杆菌

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Several species of helicobacter have been isolated from laboratory mice, including H. bilis, H. hepaticus, H. muridarum, H. rodentium, and H. typhlonius, which appear to be the most common. The most widely used published method for molecular detection of these agents is PCR amplification of a conserved region of 16S rRNA, but differential speciation requires restriction enzyme digestion of the amplicons. This study was undertaken to determine PCR conditions that would simultaneously and specifically identify each of the five common species without restriction enzyme analyses. First, we designed novel and specific PCR primers for H. bilis, H. hepaticus, H. muridarum, H. rodentium, and H. typhlonius, using sequences from the heterologous regions of 16S rRNA. Because of comigration of amplified products, we next identified P17, an H. bilis-specific protein; P25, an H. hepaticus-specific protein; and P30, an H. muridarum-specific protein by screening genomic DNA expression libraries of each species. Primers were designed from these three genes, plus newly designed, species-specific 16S rRNA primers for H. rodentium and H. typhlonius that could be utilized for a five-plex PCR. The sizes of the amplicons from H. bilis, H. hepaticus, H. muridarum, H. rodentium, and H. typhlonius were 435, 705, 807, 191, and 122 bp, respectively, allowing simultaneous detection and effective discrimination among species.
机译：从实验室小鼠中分离出了几种幽门螺杆菌，包括 H。 bilis ， H。肝， H。 muridarum ， H。啮齿动物和 H。 typhlonius ，这似乎是最常见的。用于这些试剂的分子检测的最广泛使用的公开方法是16S rRNA保守区的PCR扩增，但是差异性物种形成需要扩增子的限制性酶切。进行这项研究来确定无需同时进行限制性酶分析即可同时特异性鉴定五种常见物种的PCR条件。首先，我们为 H设计了新颖且特异性的PCR引物。 bilis ， H。肝， H。 muridarum ， H。啮齿动物和 H。台风，使用16S rRNA异源区域的序列。由于进行了扩增产物的交换，我们接下来鉴定了P17，即H。胆汁特异性蛋白; P25， H。肝特异性蛋白和P30， H。通过筛选每个物种的基因组DNA表达文库，获得muridarum特异蛋白。从这三个基因设计引物，再加上新设计的针对 H的物种特异性16S rRNA引物。 ent 和 H。可以用于五重PCR的typhlonius 。来自 H的扩增子的大小。 bilis ， H。肝， H。 muridarum ， H。啮齿动物和 H。 typhlonius 分别为435、705、807、191和122 bp，可以同时检测和有效区分物种。

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