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首页> 外文期刊>BioMed research international >High-Level Expression of Functionally Active Dengue-2 Non-Structural Antigen 1 Production inEscherichia coli
【24h】

High-Level Expression of Functionally Active Dengue-2 Non-Structural Antigen 1 Production inEscherichia coli

机译：大肠杆菌中功能活性登革2非结构性抗原1生产的高水平表达。

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Detection of nonstructural protein (NS1) is an important diagnostic marker during acute phase of dengue infection. Not only for diagnostic purpose, the protein had important role in vaccine design as well, as a candidate for studying virus assembly and maturation. Various researchers employed different expression systems and strategies for recombinant NS1 protein production. Attempts to express NS1 protein in prokaryotic and yeast expression system result in formation of insoluble protein which needs to undergo refolding to attain native structural and functional forms. Here, we report the production of soluble NS1 protein inE. coliby using appropriate vector and employing suitable culture conditions to maximize protein production. Proteins were purified using metal affinity chromatography. SDS-PAGE and western blot analysis reveal the native structure of NS1 protein. Solid phase ELISA using the recombinantly expressed antigen with positive and negative dengue samples showed that the expressed protein retains its antigenic and immunological properties. To our knowledge, this is the first report on the successful production of functionally active recombinant dengue-2 NS1 protein production without undergoing anyin vitroposttranslational modification process.
机译：非结构蛋白（NS1）的检测是登革热感染急性期的重要诊断标志。这种蛋白质不仅用于诊断目的，而且在疫苗设计中也具有重要作用，是研究病毒装配和成熟的候选药物。许多研究人员采用了不同的表达系统和策略来重组NS1蛋白。尝试在原核和酵母表达系统中表达NS1蛋白会导致形成不溶性蛋白，需要对其进行重折叠才能获得天然的结构和功能形式。在这里，我们报告了可溶性NS1蛋白在E中的产生。通过使用合适的载体并采用合适的培养条件来最大化蛋白质产量。使用金属亲和色谱法纯化蛋白质。 SDS-PAGE和蛋白质印迹分析揭示了NS1蛋白的天然结构。使用重组表达的抗原与阳性和阴性登革热样品进行固相ELISA显示，表达的蛋白保留了其抗原和免疫学特性。据我们所知，这是关于成功生产具有功能活性的重组登革热2 NS1蛋白且未进行任何体外翻译后修饰过程的报道。

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